抗內(nèi)皮素A型受體抗體在狼瘡相關(guān)肺動(dòng)脈高壓中的致病性研究.pdf

1、目的：探討抗內(nèi)皮素A型受體抗體（ENRA-Ab）作為新的生物標(biāo)記物在系統(tǒng)性紅斑狼瘡相關(guān)肺動(dòng)脈高壓（SLE-PAH）中的臨床意義，并通過一系列體外、體內(nèi)實(shí)驗(yàn)揭示其可能的抗體介導(dǎo)的SLE-PAH免疫致病機(jī)理。
　　方法：重組人內(nèi)皮素 A型受體(ENRA)為靶抗原，建立 ELISA檢測 SLE-PAH組（n=86）、SLE組（n=80）及正常對(duì)照組（n=60）血清中的ENRA-Ab，以正常對(duì)照組均值+3倍標(biāo)準(zhǔn)差為界值；部分接受抗 PAH

2、靶向治療的患者檢測該抗體的動(dòng)態(tài)變化。通過結(jié)構(gòu)模建分析合成4條ENRA的表位肽段，應(yīng)用已建立的ELISA方法和內(nèi)部一致性信度分析篩選肽段，建立基于抗原肽的ENRA-Ab的ELISA方法。進(jìn)而分析ENRA-Ab與SLE-PAH臨床表型、嚴(yán)重性和預(yù)后的關(guān)聯(lián)。抗原肽+佐劑免疫動(dòng)物獲得多抗IgG，體外不同條件下刺激血管平滑肌細(xì)胞(SMC)、內(nèi)皮細(xì)胞(EC)，xCELLigence系統(tǒng)實(shí)時(shí)監(jiān)測SMC增殖，血管通透性試劑盒檢測內(nèi)皮屏障通透性，RT-P

3、CR檢測PAH主要致病因子的轉(zhuǎn)錄表達(dá)。亞劑量野百合堿（MCT）構(gòu)建PAH大鼠動(dòng)物模型，尾靜脈給予ENRA-Ab IgG及對(duì)照IgG,從右心室肥厚指數(shù)、肺血管造影、病理組化觀察該抗體對(duì)PAH進(jìn)展的影響。
　　結(jié)果： SLE-PAH組超過40％的患者存在ENRA-Ab，明顯高于SLE組和正常對(duì)照組。該抗體水平與SLE-PAH患者心彩超估測肺動(dòng)脈收縮壓（PASP）有顯著相關(guān)性（r=0.3922,p=0.002）,部分接受抗PAH治療的患

4、者此抗體滴度下降，其水平隨病情波動(dòng)而變化。ENRA-Ab與SLEDAI評(píng)分、6分鐘步行距離（6MWD）、NYHA心功能分級(jí)、腦鈉尿肽（BNP）及短期預(yù)后無顯著相關(guān)性。體外試驗(yàn)證實(shí)ENRA-Ab可刺激SMC增殖，增強(qiáng)內(nèi)皮素-1（ET-1）對(duì)SMC的增殖效應(yīng)；增加血管內(nèi)皮屏障的通透性；促進(jìn)血管細(xì)胞表達(dá)PAH主要致病因子，且這一作用可被內(nèi)皮素受體拮抗劑適當(dāng)抑制。在亞劑量MCT誘導(dǎo)的PAH模型中，ENRA-Ab可加重大鼠右心室肥厚、肺血管閉塞，