NDRG2基因在膽囊癌中的表達及其對膽囊癌細胞生長的影響.pdf

1、第一章NDRG2在膽囊癌組織中的表達、臨床病理和預后意義
　　目的:
　　檢測NDRG2蛋白在膽囊良、惡性疾病中的表達強度，并結合相關臨床病理資料，分析影響NDRG2蛋白表達的有關因素，初步探討NDRG2蛋白在膽囊良、惡性疾病發(fā)生發(fā)展過程中的作用和臨床意義。
　　方法:
　　收集內蒙古包鋼醫(yī)院普外科2009年9月至2011年8月手術切除的膽囊癌標本130例及其相應癌旁組織。所以病例術前皆未經過放、化療及其他輔助性

2、治療，且必須有完整的住院病歷資料。全部標本皆采用常規(guī)石蠟包埋切片，免疫組化技術及Western Blot檢測標本中NDRG2蛋白的表達強度。并統(tǒng)計分析病例的相關臨床病理資料，對相關因素進行x2檢驗。
　　結果:
　?、貼DRG2蛋白在膽囊癌中的表達明顯低于相應癌旁組織(P＜0.005);
　　②NDRG2蛋白在TNMⅡ期中的表達低于在TNMⅠ期中的表達(P=0.003)
　?、塾辛馨徒Y轉移和浸潤的膽囊癌，其NDR

3、G2蛋白陽性率明顯低于無淋巴結轉移或浸潤者(P=0.008)。
　　結論:
　　NDRG2蛋白在膽囊癌中顯著低表達，其表達強度與膽囊癌的分期、分級和臨床預后有密切關系;從癌前病變發(fā)展成膽囊癌的過程中，NDRG2蛋白可能發(fā)揮了重要作用，檢測其表達強度有助于在癌前病變階段早期發(fā)現膽囊癌。
　　第二章NDRG2真核表達載體構建及穩(wěn)定轉染GBC-SD細胞系的建立目的構建人NDRG2真核表達載體，轉染GBC-SD細胞，建立穩(wěn)定轉

4、染的GBC-SD細胞系。方法采用PCR方法，以人膽囊癌組織cDNA文庫為模板擴增人NDRG2基因的全長cDNA編碼區(qū)序列，利用DNA重組技術將其定向插入到真核表達載體pcDNA3.1，經酶切和測序鑒定后，用脂質體轉染法轉染GBC-SD細胞，通過G418篩選，建立穩(wěn)定轉染的GBC-SD細胞系，用RT PCR、Western blot檢測NDRG2的表達。結果構建了pcDNA3.1/NDRG2真核表達載體，建立了穩(wěn)定轉染的GBC-SD細胞系

5、，并成功地表達了目的基因。結論真核表達載體成功構建和穩(wěn)定轉染GBC-SD細胞系的建立為進一步研究NDRG2的功能奠定了良好的實驗基礎。
　　第三章NDRG2基因對人膽囊癌細胞株GBC-SD生物學特性的影響。
　　目的:觀察NDRG2重組載體在體內、外對GBC-SD生長的影響，以探討NDRG2基因與膽囊癌之間的相關性，為探索NDRG2真核表達載體作為膽囊癌基因治療靶點提供思路。
　　方法:采用MTT及流式細胞術檢測GBC

6、-SD、GBC-SD-Ve及GBC-SD-NDRG2三組中細胞周期、凋亡率及細胞增殖等生物學行為的變化;將三組細胞接種裸鼠皮下成瘤，建立裸鼠異體移植膽囊癌模型，觀察瘤體生長速度及瘤體大小，免疫組化法檢測瘤體組織中NDRG2基因的蛋白表達，評價重組載體pcDNA3.1-NDRG2對膽囊癌細胞GBC-SD裸鼠體內致瘤活性及生長活性的影響。
　　結果:重組載體pcDNA3.1-NDRG2轉染GBC-SD細胞形成抗性克隆后，與未轉染組相比

7、，G2/S期細胞比例明顯增多，G1期細胞比例明顯減少，凋亡率明顯增高，細胞生長速度明顯減慢，細胞抑制率明顯增高，表明重組載體在體外能抑制GBC-SD細胞增殖;建立裸鼠異體移植膽囊癌模型后，三組的成瘤潛伏期均為5天，4周后處死裸鼠發(fā)現，GBC-SD組細胞在裸鼠體內生長較GBC-SD-NDRG2組細胞生長快，兩組平均瘤體體積分別為384.17±72.84和178.13±29.75mm3，抑瘤率為50.0％，瘤體組織內NDRG2基因的蛋白表達