CTGF反義寡核苷酸對(duì)腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的作用.pdf

1、該實(shí)驗(yàn)通過(guò)研究CTGF反義寡核苷酸對(duì)TGF-β<,1>誘導(dǎo)的TEMT及細(xì)胞外基質(zhì)膠原Ⅲ的影響,反證TGF-β-CTGF的致TEMT及纖維化作用,并通過(guò)CTGF反義寡核苷酸對(duì)CTGF的特異性阻斷作用,為RIF的防治提供新的方法.方法:將體外培養(yǎng)的正常大鼠腎小管上皮細(xì)胞(NRK52E)分為空白組、TGF-β<,1>組、空脂質(zhì)體組、反義對(duì)照組和反義組,每組設(shè)三復(fù)孔.經(jīng)脂質(zhì)體介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)染后,加TGF-β<,1>刺激48h.以RT-PCR檢測(cè)CT

2、GF反義寡核苷酸對(duì)CTGF的阻斷作用,以RT-PCR、流式細(xì)胞儀和免疫組織化學(xué)方法定量及定性檢測(cè)肌纖維母細(xì)胞特異性標(biāo)志物α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA),倒置相差顯微鏡、掃描電鏡觀察細(xì)胞形態(tài)和超微結(jié)構(gòu),應(yīng)用ELISA法分析測(cè)定培養(yǎng)細(xì)胞上清液膠原Ⅲ的含量.結(jié)論:1反義寡核苷酸的阻斷作用反向證明,CTGF能誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞發(fā)生肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)分化,促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)膠原Ⅲ的合成,且這種作用是TGF-β的下游效應(yīng).2 CTGF反義寡核苷酸能夠抑制