對(duì)蝦白斑癥病毒快速檢測(cè)試劑盒的研制及其應(yīng)用.pdf

1、研究生學(xué)位論文對(duì)蝦白斑癥病毒快速檢測(cè)試劑盒的研制及其應(yīng)用《^ ±舯 至曼垂≈* t ·№$ 釀文斌鞍捶·* ' ∞“——! ! —L f n t -} * ㈣—型墮±! ，L ．中國(guó)海洋大學(xué)央心免瘦層析法，制成快速檢測(cè)、診斷W S S V 的試紙條。整個(gè)反應(yīng)只需5 分鐘，并且不需要孵育和任何儀器設(shè)備。硝酸纖維膜i 二檢測(cè)線處顯示肉眼可見(jiàn)的紅色線條表示w s s v N 性?！痡 斑點(diǎn)免疫印

2、跡法進(jìn)行比較，兩者的檢測(cè)靈敏度相l(xiāng) 司。I 型而，門(mén)斑癥病毒現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)試紙條是一種快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、適合于現(xiàn)場(chǎng)使用的w S S V檢測(cè)、滲斷試紙條，并且無(wú)假陽(yáng)性。此試紙條尤其方便養(yǎng)殖人員現(xiàn)場(chǎng)、時(shí)事跟蹤監(jiān)控、檢測(cè)，為白斑癥的預(yù)防提供可靠監(jiān)測(cè)依據(jù)。以E 一斑癥病毒快速檢測(cè)試劑盒和白斑癥病毒現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)試紙條由于用膠體金代替酶標(biāo)記在用丁檢測(cè)的抗體l 二，因而，避免了酶聯(lián)免疫檢測(cè)法凼內(nèi)源酶干擾導(dǎo)致的假陽(yáng)性。將滲濾與層析原理用于檢測(cè)中，使檢測(cè)速度縮減N

3、 5 分鐘內(nèi)出結(jié)果。與以往檢測(cè)w s s v 較快的斑點(diǎn)免疫印跡法的3 小時(shí)相比，則很大程度上提高了檢測(cè)速度。同時(shí)，我們?cè)诎装甙Y病毒快速檢測(cè)試劑盒和白斑癥病毒現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)試紙條的研制，為白斑癥的監(jiān)控了提供可靠的監(jiān)測(cè)依據(jù)的基礎(chǔ)上，對(duì)白斑癥病毒感染與病毒囊膜完整性的關(guān)系進(jìn)行了探討，為深入研究如何切斷W S S V 感染途徑，為白斑癥的預(yù)防提供一條新思路、新方法積累實(shí)驗(yàn)依據(jù)。本論文實(shí)驗(yàn)中，利用物理低滲方法即用蒸餾水使W S S V 的囊膜全部破碎

4、，破壞了病毒囊膜完整性，用此病毒做螯蝦體內(nèi)、外感染實(shí)驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)W S S V的囊膜完全破碎后仍具有感染性。在此基礎(chǔ)上，分別用抗W S S V 囊膜的單抗4 G 9和抗W S S V 核衣殼單抗2 A 3 進(jìn)行螯蝦體內(nèi)中和實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示抗W S S V 囊膜的單抗有中和作用，而抗W S S V 核衣殼單抗無(wú)中和作用。將破碎的囊膜從核衣殼上去掉后，用不同濃度的純核衣殼重復(fù)以上體內(nèi)感染實(shí)驗(yàn)，結(jié)果其感染性消失，說(shuō)明囊膜破碎的W S S V 引

5、起的感染是由W S S V 上的破碎囊膜介導(dǎo)的病毒侵染所致，而不是核衣殼被直接內(nèi)吞引起的。這些結(jié)果提示W(wǎng) S S V 是否引起靶細(xì)胞感染，主要與病毒囊膜上與病毒侵染有關(guān)的功能蛋白的量和活性有直接關(guān)系，只要這些功能蛋白活性不變并且存在的量足以與靶細(xì)胞膜結(jié)合，即使W S S V 囊膜破碎、結(jié)構(gòu)小完整也能引起感染，這可能是W S S V 多年來(lái)‘直肆虐、難以控制傳播的主要原因之一。關(guān)鍵詞：W S S V ； 斑點(diǎn)免疫金滲濾法：免疫膠體金層析技