妊娠婦女HBV基因型檢測及其與宮內(nèi)感染的相關(guān)性研究.pdf

1、第一軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文妊娠婦女HBV基因型檢測及其與宮內(nèi)感染的相關(guān)性研究姓名：宋天蓉申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：婦產(chǎn)科學(xué)指導(dǎo)教師：鐘梅20050605中文摘要目的：1建立寡核苷酸陣列檢測HBV基因型的方法，探討其可行性。2對各基因型的宮內(nèi)感染率進(jìn)行分析，探討HBV宮內(nèi)感染中是否存在優(yōu)勢基因型。材料與方法：1以HBV前C區(qū)的各型的特異性的區(qū)域及共同區(qū)域做為探針，將修飾后的探針陣列于“活化”的帶負(fù)電的尼龍膜上。設(shè)計(jì)通用引物并在引物5’端加上生

2、物素修飾用于擴(kuò)增病毒目的基因。將通用引物的PCR產(chǎn)物進(jìn)行寡核苷酸陣列雜交，加入標(biāo)記有堿性磷酸酶的鏈霉抗生物素蛋白(鏈親和素)，與雜交產(chǎn)物上標(biāo)記的生物素結(jié)合。隨后加入BCIP／NBT顯色底物，陽性結(jié)果顯現(xiàn)藍(lán)紫色，根據(jù)顯色結(jié)果檢測HBV基因型。2擴(kuò)增B、C、D型病毒質(zhì)粒的目的基因用于寡核苷酸陣列方法的優(yōu)化。3寡核苷酸陣列對169份血清的基因型進(jìn)行檢測，對不能確定基因型及檢測結(jié)果為D型的血清，對其PCR產(chǎn)物進(jìn)行核苷酸測序，序列輸入DNASIS

3、中，與已發(fā)表的HBV基因型序列進(jìn)行同源性比較，明確其基因型。對檢測結(jié)果為B、C基因型的血清用限制性內(nèi)切酶方法明確基因型。確定寡核苷酸陣列的準(zhǔn)確性。4根據(jù)169名孕婦的HBVDNA復(fù)制水平分為1組DNA103copy／ml，2組DNAl03copies／m1，3組DNAIO”9copies／ml。檢測相同基因型在不同復(fù)制水平宮內(nèi)感染發(fā)生的差異；同一復(fù)制水平不同基因型宮內(nèi)感染的差異。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理將所有數(shù)據(jù)輸入SPSSIO0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分