蓽茇酰胺殺傷膠質(zhì)母細(xì)胞瘤和肝癌細(xì)胞的作用及其機(jī)制.pdf

1、本文主要從以下幾方面展開論述：
　　第一部分 蓽茇酰胺選擇性殺傷膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞的作用和機(jī)制
　　研究背景：蓽茇酰胺（Piperlongumine,PL）是一種從長柄胡椒中分離出的天然生物堿，具有選擇性殺傷一些腫瘤細(xì)胞的作用。但蓽茇酰胺是否對膠質(zhì)母細(xì)胞瘤具有殺傷作用還不清楚。本實(shí)驗(yàn)主要研究蓽茇酰胺對膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞的殺死作用和機(jī)制。
　　方法：3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴鹽(MTT)實(shí)驗(yàn)和流式

2、細(xì)胞儀方法測定細(xì)胞活力和凋亡。Hoechst33342核染色觀察細(xì)胞死亡。Western blot測定p-JNK/JNK、p-p38/p38、p-Erk/Erk和p-Akt/Akt等蛋白表達(dá)水平。DCFH-DA染色測定活性氧水平。微量谷胱甘肽試劑盒測定細(xì)胞內(nèi)谷胱甘肽的水平。流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期。
　　結(jié)果：蓽茇酰胺（20μM）可誘導(dǎo)三種膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞株(LN229，U87和8MG)細(xì)胞死亡，而對原代培養(yǎng)的大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞則無明

3、顯殺傷作用。蓽茇酰胺顯著升高LN229和U87細(xì)胞中活性氧（ROS）水平，同時降低還原型谷胱甘肽（GSH）水平。抗氧化劑N-乙?；?L-半胱氨酸（NAC）完全逆轉(zhuǎn)蓽茇酰胺對LN229和U87的細(xì)胞殺傷作用和活性氧升高。蓽茇酰胺處理 LN229和U87細(xì)胞后顯著激活JNK和p38，具有劑量依賴性，但對Erk和Akt激活無影響。NAC完全阻斷蓽茇酰胺對JNK和p38的激活作用。JNK和p38特異性抑制劑SP600125和SB203580明顯

4、降低由蓽茇酰胺誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡。
　　結(jié)論：蓽茇酰胺通過誘導(dǎo)活性氧水平升高，進(jìn)而激活JNK和p38，發(fā)揮選擇性殺傷膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞的作用。
　　第二部分 蓽茇酰胺殺傷肝癌細(xì)胞的作用和機(jī)制
　　研究背景：蓽茇酰胺可通過升高ROS水平特異性殺死癌細(xì)胞，具有腫瘤治療前景。但蓽茇酰胺對肝癌細(xì)胞的作用尚未見報道。本實(shí)驗(yàn)主要研究蓽茇酰胺體內(nèi)外殺傷肝癌細(xì)胞的作用和機(jī)制。
　　方法：MTT實(shí)驗(yàn)測定細(xì)胞活力。Hoechst33342

5、核染色、PI染色和臺盼藍(lán)染色觀察細(xì)胞死亡。DCFH-DA染色測定活性氧水平。微量谷胱甘肽試劑盒測定細(xì)胞內(nèi)谷胱甘肽的水平。Fluo-3AM熒光探針測定細(xì)胞內(nèi)Ca2+的變化。Wetern blot測定內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)和激活水平。H22細(xì)胞皮下注射構(gòu)建體內(nèi)肝腫瘤模型，檢測蓽茇酰胺在體內(nèi)的肝癌治療作用。
　　結(jié)果：蓽茇酰胺的肝癌細(xì)胞(HepG2和Huh7)半數(shù)抑制濃度(IC50)為10-20μM。蓽茇酰胺顯著提高肝癌細(xì)胞ROS