光周期、鹽度、溫度對(duì)孤雌鹵蟲的滯育誘導(dǎo)效應(yīng)研究.pdf

1、鹵蟲是一類生活在高鹽環(huán)境中的小型甲殼動(dòng)物，因其休眠卵具有重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，使得鹵蟲成為一種潛在的人工養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)品種。無(wú)論是孤雌生殖還是兩性生殖類型的鹵蟲都具有兩種繁殖模式:滯育模式（母體產(chǎn)休眠卵）和非滯育模式（母體產(chǎn)無(wú)節(jié)幼體）。目前尚無(wú)成熟的技術(shù)能實(shí)現(xiàn)鹵蟲繁殖模式的完全人工可控，繁殖模式的控制實(shí)際上涉及的是在昆蟲中研究比較集中的滯育誘導(dǎo)這一問(wèn)題，通過(guò)明確環(huán)境生態(tài)因子對(duì)鹵蟲的滯育誘導(dǎo)效應(yīng)、確定其滯育誘導(dǎo)敏感期，將有助于發(fā)明調(diào)控繁殖模式的方法和

2、闡釋滯育誘導(dǎo)的機(jī)制。為此，本文開(kāi)展了如下四方面的工作:
　　1.利用孤雌生殖鹵蟲克隆種群為研究對(duì)象，通過(guò)實(shí)驗(yàn)生態(tài)學(xué)方法研究了鹽度與溫度、鹽度與光周期、溫度與光周期組合對(duì)鹵蟲的滯育誘導(dǎo)效應(yīng)，在鹽度與溫度組合中，利用雙因子重復(fù)數(shù)據(jù)方差分析顯示溫度對(duì)滯育胎次比例影響極顯著(p＜0.01)，鹽度的影響不顯著，而鹽度與溫度的交互效應(yīng)不顯著;在鹽度與光周期組合中，雙因子重復(fù)數(shù)據(jù)方差分析結(jié)果顯示，光周期對(duì)鹵蟲滯育胎次比例的影響極顯著(p＜0.0

3、1)，鹽度的影響不顯著，而鹽度與光周期的交互效應(yīng)極顯著(p＜0.01);在溫度與光周期組合中，雙因子重復(fù)數(shù)據(jù)方差分析結(jié)果顯示，溫度(p＜0.01)、光周期(p＜0.01)對(duì)滯育胎次比例均有極顯著的影響，溫度與光周期的交互效應(yīng)極顯著(p＜0.01)。研究結(jié)果顯示長(zhǎng)光照周期和較高溫度更有利于非滯育模式的發(fā)生，但長(zhǎng)光照周期對(duì)非滯育模式誘導(dǎo)的效應(yīng)可以被高鹽度抵消，然而溫度對(duì)繁殖模式的影響不受高鹽度的干擾。與溫度相比，光周期對(duì)繁殖模式的影響作用更

4、大，當(dāng)溫度與光周期對(duì)繁殖模式的影響效應(yīng)相反時(shí)，繁殖模式更多的是表現(xiàn)光周期的影響效應(yīng)。另外，所有各組的研究結(jié)果顯示，除了個(gè)別胎次，繁殖模式與胎次間無(wú)明顯相關(guān)性。
　　2.在確定了光周期、溫度和鹽度對(duì)克隆種群的滯育誘導(dǎo)效應(yīng)的基礎(chǔ)上，通過(guò)設(shè)置非滯育模式養(yǎng)殖條件和滯育模式養(yǎng)殖條件間的轉(zhuǎn)移養(yǎng)殖試驗(yàn)，研究并確定了鹵蟲具有滯育誘導(dǎo)敏感期;該滯育誘導(dǎo)敏感期處于后期幼蟲Ⅲ期和后期幼蟲Ⅳ期之間，該時(shí)期生殖節(jié)部位最主要的特征如下:從側(cè)面觀，卵囊端已自由

5、懸掛于腹節(jié)腹面，并超過(guò)生殖節(jié)，達(dá)到第三腹節(jié)的中央;組織學(xué)特征顯示在滯育誘導(dǎo)敏感期卵巢發(fā)育階段為卵黃發(fā)生前卵母細(xì)胞期。
　　3.在確定滯育誘導(dǎo)敏感期的基礎(chǔ)上，通過(guò)克隆ArHsp22基因的編碼區(qū)部分片段并利用q RT-PCR半定量研究了兩種繁殖模式下滯育誘導(dǎo)敏感期前、滯育誘導(dǎo)敏感期和滯育誘導(dǎo)敏感期后三個(gè)發(fā)育階段該基因的表達(dá)情況，結(jié)果表明在滯育模式下，ArHsp22 mRNA表達(dá)量在滯育誘導(dǎo)敏感期后較滯育誘導(dǎo)敏感期和滯育誘導(dǎo)敏感期前顯著

6、升高;在非滯育模式下，三個(gè)發(fā)育階段無(wú)顯著差異;而在滯育誘導(dǎo)敏感期，滯育模式與非滯育模式間ArHsp22 mRNA表達(dá)量無(wú)顯著差異，提示該基因可能與滯育誘導(dǎo)并無(wú)關(guān)聯(lián)，而僅與成體本身應(yīng)對(duì)極端環(huán)境以及保護(hù)休眠胚胎有關(guān)。
　　4.基于昆蟲黑化誘導(dǎo)激素(Corazonin，Crz)及其受體結(jié)構(gòu)上與甲殼動(dòng)物的促性腺激素釋放激素(GnRH)及受體有著最近的親緣關(guān)系，并且Crz激素與昆蟲的滯育誘導(dǎo)具有密切的相關(guān)性，本文通過(guò)免疫組織化學(xué)和蛋白免疫印

7、跡的方法研究了GnRH受體類似物在鹵蟲體內(nèi)的分布以及在滯育誘導(dǎo)敏感期前、中、后三個(gè)階段的差異性表達(dá)。結(jié)果表明，GnRH受體類似物主要位于鹵蟲眼柄的感光系統(tǒng)區(qū)，視神經(jīng)神經(jīng)節(jié)區(qū)，視葉髓質(zhì)區(qū);部分腦區(qū);小顎器的端囊以及部分排泄管區(qū);生殖節(jié)的卵殼腺，而在卵母細(xì)胞無(wú)明顯陽(yáng)性反應(yīng)物出現(xiàn)。蛋白免疫印跡半定量分析顯示:非滯育模式下，GnRH受體類似物表達(dá)量在不同發(fā)育階段無(wú)顯著性差異，三個(gè)發(fā)育階段表達(dá)量相當(dāng)。在滯育模式下，GnRH受體類似物表達(dá)量在滯育誘