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文檔簡介
1、輪狀病毒(Rotavirus)作為一種重要的腸道微生物,能造成多種小動物和新生嬰幼兒腹瀉。PoRV與PEDV、TGEV并稱為引起腹瀉的三大病毒。目前,在世界上許多國家和地區(qū)均發(fā)現輪狀病毒可引起相關腹瀉疾病,對農業(yè)帶來了巨大的經濟損失。
本實驗室自2013年到2014年,在全國不同省市和地區(qū)采集腹瀉樣品362份,進行流行病學調查,檢測結果顯示,362份樣品中,PEDV的陽性樣品數為223份,陽性率為61.6%,TGEV的陽性樣品
2、數為2份,陽性率為0.55%; PoRV的陽性樣品數為8份,陽性率為2.2%;PKV的陽性樣品數為66份,陽性率為18.23%。將來自江蘇省某發(fā)病豬場的輪狀病毒陽性樣品處理并與20ug/mL胰酶等體積混合后接種至MA-104細胞上,盲傳8代,細胞出現變圓、拉網、脫落等病變。PCR及測序結果顯示為豬輪狀病毒,命名為JS株。三次蝕斑克隆純化后測定TCID50為10-6.875/mL,中和試驗用病毒的最佳稀釋倍數為150倍,并建立抗體檢測方法
3、。JS分離株的VP4基因型與P[7]基因型同源性最高,VP7基因型與G[9]基因型同源性最高。根據A群輪狀病毒最新分類方法,JS分離株屬于P[7]G[9]型。
采用環(huán)介導等溫擴增技術,建立了一種快速檢測輪狀病毒的實驗方法。結果顯示,當反應體系中甜菜堿濃度為0.8M,鎂離子濃度為2mM,最佳反應溫度為63℃時反應60min,擴增可達最佳效果。且該方法特異性良好,靈敏度為RT-PCR的100倍。可用于現場檢測,具有良好的應用前景。
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