肥胖小鼠下丘腦NPY、AGRP的變化及其與瘦素的關(guān)系.pdf

1、目的:檢測不同周齡肥胖及正常小鼠下丘腦組神經(jīng)肽Y（neuropeptideY，NPY）、刺鼠相關(guān)蛋白(Agouti—relatedprotein，AGRP)mRNA及蛋白的表達(dá)以及血漿瘦素水平，比較肥胖小鼠及正常小鼠上述指標(biāo)的差異;探討肥胖小鼠及正常小鼠不同周齡下丘腦組織NPY、AGRP表達(dá)的變化規(guī)律及其與瘦素的關(guān)系，為進(jìn)一步研究肥胖的發(fā)病機(jī)制提供科學(xué)依據(jù)。
　　 方法:選用健康C57/b16乳鼠60只（周齡6周，雌雄各半），隨

2、機(jī)分為對照組（24只）和試驗(yàn)組（36只）。對照組喂養(yǎng)普通飼料，實(shí)驗(yàn)組喂養(yǎng)高脂飼料。喂養(yǎng)至12周時(shí)，隨機(jī)選擇對照組12只，實(shí)驗(yàn)組18只，稱體重(Wt)后按照“體重＞對照組體重均數(shù)+2倍標(biāo)準(zhǔn)差”篩選出肥胖小鼠11只，測量體長，眼球取血并取下丘腦組織。剩余小鼠喂養(yǎng)至24周時(shí)對照組12只及實(shí)驗(yàn)組篩選的肥胖小鼠13只，測量體長，眼球取血并取下丘腦組織和腸系膜周圍脂肪組織。小鼠全血離心后取上層血清，葡萄糖氧化酶法檢測其空腹血糖(FPG)，全自動生化

3、分析儀檢測甘油三脂(TG)，酶聯(lián)免疫法(ELISA)法分別檢胰島素(fastinginsulin)，瘦素(leptin)指標(biāo)，計(jì)算Lee's指數(shù)[體重(g)1/3×1000/身長(cm)]及穩(wěn)態(tài)模型胰島素抵抗指數(shù)（HOMA-IR=血糖×胰島素/22.5）。TRIZOL法提取小鼠下丘腦的mRNA，RT-PCR檢測NPY、AGRP表達(dá);熒光定量PCR法檢測下丘腦NPY、AGRPmRNA含量;提取下丘腦組織蛋白，用Westernblot檢測下

4、丘腦NPY、AGRP的表達(dá);脂肪組織HE染色觀察脂肪細(xì)胞大小。
　　 結(jié)果:①與同周齡對照組小鼠相比，12周及24周肥胖組小鼠Wt、Lee's指數(shù)、FPG、TG、LEP、FINS及HOMA-IR均升高。②在肥胖組小鼠中，24周齡較12周齡小鼠血清胰島素、瘦素及HOMA-IR增加。對照組小鼠中24周瘦素水平高于12周，但胰島素及HOMA-IR無差異。③相同放大倍數(shù)視野下，肥胖組小鼠脂肪細(xì)胞數(shù)目較正常組減少，脂肪細(xì)胞面積增大;正常組

5、及肥胖組24周脂肪細(xì)胞數(shù)目均較12周減少，脂肪面積增大。④與同周齡對照組小鼠相比，12及24周齡肥胖組小鼠下丘腦組織NPYmRNA、AGRPmRNA及蛋白表達(dá)增加。⑤在肥胖組小鼠中，24周齡小鼠下丘腦組織NPY、AGRPmRNA及蛋白表達(dá)高于12周齡。⑥在對照組小鼠中，24周齡小鼠下丘腦組織NPY及AGRPmRNA及蛋白表達(dá)與12周齡組比較差異無顯著性。⑦直線相關(guān)分析顯示，肥胖小鼠血清瘦素與下丘腦組織NPY、AGRP表達(dá)正相關(guān)。