三氧化二砷體外誘導(dǎo)人膽管癌細(xì)胞株凋亡及其機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、中南大學(xué)博士學(xué)位論文三氧化二砷體外誘導(dǎo)人膽管癌細(xì)胞株凋亡及其機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究姓名：周軍申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：外科學(xué)指導(dǎo)教師：湯恢煥20050501博士學(xué)位論文 中文摘要第一章三氧化二砷體外誘導(dǎo)人膽管癌細(xì)胞株凋亡的實(shí)驗(yàn)?zāi)康模貉芯咳趸轶w外誘導(dǎo)人類膽管癌細(xì)胞株Q B c 9 3 9 、R B E凋亡。方法：①采用噻唑蘭比色實(shí)驗(yàn)( M T T ) 觀察三氧化二砷對(duì)膽管癌細(xì)胞株Q B c 9 3 9 、R B E 生長抑制作用；②光學(xué)顯微鏡

2、、熒光顯微鏡觀察細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)改變；③D N A 凝膠電泳觀察凋亡細(xì)胞D N A 片斷化；④流式細(xì)胞儀檢測(cè)凋亡率和細(xì)胞生長周期改變。結(jié)果：①l ～1 6 u m 0 1 ／L 三氧化二砷均可抑制兩種膽管癌細(xì)胞株的生長，細(xì)胞生長抑制率呈時(shí)間一濃度依賴性，藥物干預(yù)Q B c 9 3 9 和R B E 細(xì)胞9 6 小時(shí)的I c 。。值分別為4 ．0 1 4 u m 0 1 ／L 和1 0 ．0 1 2 u m 0 1 ／L ；②兩種膽管癌細(xì)胞

3、株均觀察到典型的細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)變化：細(xì)胞變小、皺縮、脫落漂浮細(xì)胞增多、細(xì)胞膜完整、出現(xiàn)發(fā)泡現(xiàn)象、染色質(zhì)凝集、邊聚、胞核固縮、核碎裂、凋亡小體形成等：③4 u m 0 1 ／L 三氧化二砷處理Q B c 9 3 9 細(xì)胞9 6 小時(shí)觀察到D N AL a d d e r 圖譜；④流式細(xì)胞儀檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組Q B C 9 3 9 細(xì)胞凋亡率2 4 、4 8 、7 2 、9 6 小時(shí)分別為2 ．1 2 ％、1 2 ．2 9 ％、1 5 ．1 2 ％

4、、2 1 ．7 0 ％。經(jīng)4 u m 0 1 ／L A s ：0 。干預(yù)Q B C 9 3 9細(xì)胞9 6 小時(shí)后，S 期細(xì)胞由3 6 ．7 7 ％逐漸減少到1 5 ．4 2 ％；而G 。／G 。期細(xì)胞由4 9 ．5 0 ％逐漸增加到7 2 ．7 1 ％；G 。／M 期細(xì)胞無明顯變化。三氧化二砷阻滯Q B c 9 3 9 細(xì)胞周期于G 。／G 。期。結(jié)論：①三氧化二砷能有效地抑制體外培養(yǎng)的膽管癌細(xì)胞株Q B C 9 3 9 、R B E