NIH3T3細(xì)胞中PTPα過(guò)表達(dá)產(chǎn)生的蛋白質(zhì)差異表達(dá)的初步研究.pdf

1、在對(duì)人類有嚴(yán)重危害的疾病中，惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展最為受人關(guān)注，如何能有效抑制，殺傷腫瘤細(xì)胞，關(guān)鍵在于了解腫瘤發(fā)生的機(jī)制和尋找合適的治療靶點(diǎn)，這是治療腫瘤的一項(xiàng)重要的基礎(chǔ)工作。蛋白酪氨酸磷酸酶α(PTPα)是一種典型的受體型蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶，它可以催化蛋白分子中特定位點(diǎn)的磷酸化酪氨酸殘基脫磷酸，以級(jí)聯(lián)反應(yīng)方式與其它蛋白磷酸酶在細(xì)胞內(nèi)構(gòu)成調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，與蛋白酪氨酸激酶(PTK)的作用相反，共同調(diào)節(jié)細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，在細(xì)胞生長(zhǎng)、分化、引導(dǎo)有絲分裂、T

2、細(xì)胞活化等生理過(guò)程中起著重要的作用，尤其在控制細(xì)胞磷酸化酪氨酸水平上，蛋白酪氨酸磷酸酶起著非常特異性的積極作用，甚至占據(jù)了主導(dǎo)地位。本文對(duì)NIH3T3細(xì)胞中PTPα過(guò)表達(dá)產(chǎn)生的蛋白質(zhì)差異表達(dá)進(jìn)行了研究。主要內(nèi)容如下： ⑴合成PTPα對(duì)應(yīng)的cDNA引物，通過(guò)PCR實(shí)驗(yàn)，驗(yàn)證這株穩(wěn)定轉(zhuǎn)染PTPα誘導(dǎo)表達(dá)質(zhì)粒的NIH3T3細(xì)胞，PTPα基因在DNA水平上是否具有明顯差異，驗(yàn)證之前導(dǎo)入的質(zhì)粒是否丟失；通過(guò)RT-PCR實(shí)驗(yàn)，驗(yàn)證其在DOX

3、調(diào)控下，PTPα在RNA表達(dá)水平上是否具有明顯差異；制備PTPα特異性抗體，通過(guò)WESTERN-BLOT實(shí)驗(yàn)，驗(yàn)證其在DOX調(diào)控下，PTPα在蛋白質(zhì)表達(dá)水平上是否具有明顯差異。 ⑵獲取并純化NIH3T3細(xì)胞總蛋白，BCA法進(jìn)行蛋白定量并進(jìn)行二維電泳，分析二維電泳差異點(diǎn)，對(duì)差異蛋白點(diǎn)進(jìn)行質(zhì)譜分析 ⑶合成差異蛋白對(duì)應(yīng)cDNA的引物，通過(guò)RT-PCR和REALTIME-PCR實(shí)驗(yàn)，驗(yàn)證差異蛋白在相應(yīng)的RNA表達(dá)水平上是否具有明