UHRF1在骨肉瘤細(xì)胞侵襲過程中的作用及其機(jī)制研究.pdf

1、骨肉瘤作為最常見的原發(fā)于骨組織的惡性腫瘤,在兒童和青少年的腫瘤中較為常見,通常具有惡性程度高,易復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移,預(yù)后差的特征。盡管隨著腫瘤切除術(shù)、生物治療和新輔助化療技術(shù)的聯(lián)合應(yīng)用,骨肉瘤的治愈率在近年來是有所提高的,但在骨肉瘤患者中出現(xiàn)肺轉(zhuǎn)移的病人，總體生存率仍低于50％。因此新型的分子生物學(xué)治療成為未來治療骨肉瘤的必然選擇方向。
　　UHRF1是一個具有多個結(jié)構(gòu)域的核蛋白，其生理作用可以促進(jìn)細(xì)胞增殖和促進(jìn)細(xì)胞凋亡，在保持DNA的甲

2、基化狀態(tài)及表觀修飾的遺傳起著重要作用。近年來發(fā)現(xiàn)在多種惡性腫瘤細(xì)胞中異常高表達(dá)，且密切地參與了腫瘤的發(fā)生、侵襲、轉(zhuǎn)移及放化療敏感性抵抗，由此可能成為腫瘤基因治療的一個新靶點(diǎn)。但是UHRF1在骨肉瘤細(xì)胞中的作用并不明了，在本實(shí)驗中，我們研究UHRF1在骨肉瘤細(xì)胞中侵襲過程中的作用，及其相關(guān)作用機(jī)制。
　　目的：
　　1.研究UHRF1在骨肉瘤細(xì)胞的侵襲過程中的所發(fā)揮的作用。
　　2.研究UHRF1在骨肉瘤細(xì)胞的侵襲過程中

3、的作用機(jī)制。
　　方法：
　　1.檢測UHRF1在骨肉瘤細(xì)胞系MG-63, Saos-2, U2OS和 HOS中的表達(dá)水平，然后利用 CCK-8增殖實(shí)驗來檢測過表達(dá) UHRF1對骨肉瘤細(xì)胞系增殖能力的影響。
　　2.利用Transwell侵襲實(shí)驗檢測UHRF1對骨肉瘤細(xì)胞MG-63, Saos-2, U2OS和 HOS侵襲能力的作用。
　　3.Western blot檢測骨肉瘤細(xì)胞中Rb1基因的表達(dá)水平，然后采用

4、慢病毒感染干擾Rb1基因陽性細(xì)胞中的Rb1基因表達(dá)，檢測UHRF1對其侵襲能力的影響。
　　4.Western blot檢測過表達(dá)UHRF1對骨肉瘤細(xì)胞對Rb1和E-Cadherin的作用。
　　5.檢測UHRF1在骨肉瘤細(xì)胞上皮細(xì)胞向間葉細(xì)胞的轉(zhuǎn)化中的作用。
　　結(jié)果：
　　1.骨肉瘤細(xì)胞MG-63, Saos-2, U2OS和 HOS均有UHRF1表達(dá)，而且過表達(dá)UHRF1促進(jìn)了骨肉瘤細(xì)胞的增殖。
　　

5、2.UHRF1增加了Rb1基因陽性的MG-63的侵襲能力，而對于無Rb1基因的 Saos-2則無明顯作用。
　　3.干擾Rb1基因陽性細(xì)胞中的Rb1基因后，發(fā)現(xiàn)過表達(dá)UHRF1對其侵襲能力失去調(diào)控作用。
　　4.UHRF1通過抑制Rb1基因來抑制E-Cadherin
　　5.UHRF1促進(jìn)了Rb1表達(dá)陽性細(xì)胞的上皮細(xì)胞向間葉細(xì)胞的轉(zhuǎn)化。
　　結(jié)論：
　　1. UHRF1促進(jìn)了骨肉瘤細(xì)胞的增殖能力并增加了骨肉

6、瘤細(xì)胞的侵襲能力,促進(jìn)了上皮細(xì)胞向間葉細(xì)胞的轉(zhuǎn)化。
　　2. UHRF1增加了骨肉瘤細(xì)胞的侵襲能力是依賴Rb1表達(dá)狀態(tài)的。
　　3. UHRF1通過抑制Rb1基因表達(dá)，進(jìn)而下調(diào)E-Cadherin的表達(dá)，從而增加了骨肉瘤細(xì)胞的侵襲能力，促進(jìn)了上皮細(xì)胞向間葉細(xì)胞的轉(zhuǎn)化。
　　第一部分UHRF1在骨肉瘤細(xì)胞的侵襲過程中的作用及其機(jī)制
　　骨肉瘤作為最常見的原發(fā)于骨組織的惡性腫瘤,在兒童和青少年的腫瘤中較為常見,通常具

7、有惡性程度高,易復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移,預(yù)后差的特征。盡管隨著腫瘤切除術(shù)、生物治療和新輔助化療技術(shù)的聯(lián)合應(yīng)用,骨肉瘤的治愈率在近年來是有所提高的,但在骨肉瘤患者中出現(xiàn)肺轉(zhuǎn)移的病人，總體生存率仍低于50%。因此新型的分子生物學(xué)治療成為未來治療骨肉瘤的必然選擇方向。
　　UHRF1是一個具有多個結(jié)構(gòu)域的核蛋白，其生理作用可以促進(jìn)細(xì)胞增殖和促進(jìn)細(xì)胞凋亡，在保持DNA的甲基化狀態(tài)及表觀修飾的遺傳起著重要作用。近年來發(fā)現(xiàn)在多種惡性腫瘤細(xì)胞中異常高表達(dá)，

8、且密切地參與了腫瘤的發(fā)生、侵襲、轉(zhuǎn)移及放化療敏感性抵抗，由此可能成為腫瘤基因治療的一個新靶點(diǎn)。但是UHRF1在骨肉瘤細(xì)胞中的作用并不明了，在本實(shí)驗中，我們研究UHRF1在骨肉瘤細(xì)胞中侵襲過程中的作用，及其相關(guān)作用機(jī)制。
　　目的：
　　1.研究UHRF1在骨肉瘤細(xì)胞的侵襲過程中的所發(fā)揮的作用。
　　2.研究UHRF1在骨肉瘤細(xì)胞的侵襲過程中的作用機(jī)制。
　　方法：
　　1.檢測UHRF1在骨肉瘤細(xì)胞系MG-

9、63, Saos-2, U2OS和 HOS中的表達(dá)水平，然后利用 CCK-8增殖實(shí)驗來檢測過表達(dá) UHRF1對骨肉瘤細(xì)胞系增殖能力的影響。
　　2.利用Transwell侵襲實(shí)驗檢測UHRF1對骨肉瘤細(xì)胞MG-63, Saos-2, U2OS和 HOS侵襲能力的作用。
　　3.Western blot檢測骨肉瘤細(xì)胞中Rb1基因的表達(dá)水平，然后采用慢病毒感染干擾Rb1基因陽性細(xì)胞中的Rb1基因表達(dá)，檢測UHRF1對其侵襲能力的

10、影響。
　　4.Western blot檢測過表達(dá)UHRF1對骨肉瘤細(xì)胞對Rb1和E-Cadherin的作用。
　　5.檢測UHRF1在骨肉瘤細(xì)胞上皮細(xì)胞向間葉細(xì)胞的轉(zhuǎn)化中的作用。
　　結(jié)果：
　　1.骨肉瘤細(xì)胞MG-63, Saos-2, U2OS和 HOS均有UHRF1表達(dá)，而且過表達(dá)UHRF1促進(jìn)了骨肉瘤細(xì)胞的增殖。
　　2.UHRF1增加了Rb1基因陽性的MG-63的侵襲能力，而對于無Rb1基因的

11、Saos-2則無明顯作用。
　　3.干擾Rb1基因陽性細(xì)胞中的Rb1基因后，發(fā)現(xiàn)過表達(dá)UHRF1對其侵襲能力失去調(diào)控作用。
　　4.UHRF1通過抑制Rb1基因來抑制E-Cadherin。
　　5.UHRF1促進(jìn)了Rb1表達(dá)陽性細(xì)胞的上皮細(xì)胞向間葉細(xì)胞的轉(zhuǎn)化。
　　結(jié)論：
　　1. UHRF1促進(jìn)了骨肉瘤細(xì)胞的增殖能力并增加了骨肉瘤細(xì)胞的侵襲能力,促進(jìn)了上皮細(xì)胞向間葉細(xì)胞的轉(zhuǎn)化。
　　2. UHRF1

12、增加了骨肉瘤細(xì)胞的侵襲能力是依賴Rb1表達(dá)狀態(tài)的。
　　3. UHRF1通過抑制Rb1基因表達(dá)，進(jìn)而下調(diào)E-Cadherin的表達(dá)，從而增加了骨肉瘤細(xì)胞的侵襲能力，促進(jìn)了上皮細(xì)胞向間葉細(xì)胞的轉(zhuǎn)化。
　　第二部分CXCL12在誘導(dǎo)骨肉瘤耐藥過程中的作用及其機(jī)制
　　在以往的研究中，MTX和docetaxel被證實(shí)對骨肉瘤的治療有很有意義的作用。而對化療耐藥，是影響化療療效的主要屏障。與普通耐藥的形成機(jī)制不同，藥物壓力性誘

13、導(dǎo)有著不一樣的形成機(jī)制。我們在此研究中應(yīng)用基因芯片技術(shù)高通量地篩選 U2OS和 MG63耐藥細(xì)胞細(xì)胞株與親本細(xì)胞株之間的公共差異基因表達(dá).明確其發(fā)揮的主要調(diào)控作用及其下游通路，進(jìn)一步了解骨肉瘤耐藥的可能機(jī)制，為骨肉瘤多藥耐藥的逆轉(zhuǎn)尋找新的靶點(diǎn)。
　　目的：
　　1.探討CXCL12在MTX和docetaxel誘導(dǎo)性骨肉瘤耐藥中的作用
　　2.探討CXCL12在MTX和docetaxel誘導(dǎo)性骨肉瘤耐藥中的作用機(jī)制。

14、r>　　方法：
　　1.對MTX和docetaxel誘導(dǎo)性骨肉瘤耐藥細(xì)胞株進(jìn)行體外連續(xù)培養(yǎng)；
　　2.基因芯片檢測基因表達(dá)變化；
　　3.檢測其公共差異基因下游凋亡途徑。
　　結(jié)果：
　　1.耐藥細(xì)胞構(gòu)建成功；
　　2.基因檢測提示CXCL12為唯一非passager基因；
　　3.凋亡途徑檢測提示Bcl-xl的表達(dá)被下調(diào)。
　　結(jié)論：
　　1.CXCL12是 MTX和 doceta