豬血清IgE的提取與鑒定.pdf

1、目的：注射疫苗可以引起豬過(guò)敏反應(yīng)發(fā)生，尤其品種豬發(fā)病率較高，治療不及時(shí)極易導(dǎo)致動(dòng)物死亡。過(guò)敏反應(yīng)主要由免疫球蛋白E(ImmunoglobulinE，IgE)介導(dǎo)發(fā)生。臨床上檢測(cè)過(guò)敏反應(yīng)的方法較多，其中特異性和敏感性較高、應(yīng)用廣泛的是檢測(cè)血清IgE的含量，尤其是血清IgE的ELISA檢測(cè)方法，在人過(guò)敏反應(yīng)檢測(cè)中的已有應(yīng)用，因此分離純化到豬體內(nèi)的IgE是研究豬過(guò)敏反應(yīng)ELISA檢測(cè)方法的前提和基礎(chǔ)。IgE在正常人血清中濃度極低，正常豬血清中

2、IgE含量還未見(jiàn)有確定報(bào)道。本試驗(yàn)研究的目的是通過(guò)兩種不同方法對(duì)感染絳蟲(chóng)實(shí)驗(yàn)豬血清、致敏實(shí)驗(yàn)豬血清以及正常豬血清三種不同樣品中的IgE進(jìn)行提取，以便據(jù)此來(lái)比較不同樣品血清中IgE的提取方法的差異，并且通過(guò)SDS-PAGE電泳對(duì)血清中提取的IgE進(jìn)行鑒定，從而建立豬血清IgE的最佳的提取方法，以便今后在分離純化IgE以及抗IgE抗體等血清IgE的ELISA檢測(cè)方法方面進(jìn)行更為深入的試驗(yàn)研究。 方法：以感染絳蟲(chóng)實(shí)驗(yàn)豬血清和注射異源血

3、清而致敏的實(shí)驗(yàn)豬血清為兩個(gè)不同樣品，將兩個(gè)樣品分別經(jīng)過(guò)飽和硫酸銨鹽析-Sephadex凝膠層析-DEAE離子交換層析和硫酸銨鹽析-DEAE離子交換法-Sephadex凝膠層析兩種不同的方法分離提取血清中IgE，并利用SDS-PAGE電泳分別檢測(cè)和鑒定IgE提取物；同時(shí)，將正常豬血清樣品也經(jīng)過(guò)以上方法進(jìn)行提取和鑒定，來(lái)進(jìn)行比對(duì)。 結(jié)果：①.經(jīng)兩種方法提取感染絳蟲(chóng)實(shí)驗(yàn)豬和注射異源血清致敏實(shí)驗(yàn)豬血清中IgE，其中利用飽和硫酸銨鹽析-D