利用RAPD標(biāo)記技術(shù)進(jìn)行春小麥遺傳多樣性分析研究.pdf

1、利用RAPD標(biāo)記技術(shù)進(jìn)行春小麥遺傳多樣性分析研究摘要春小麥?zhǔn)俏覈?guó)北方主要的小麥種植類型，創(chuàng)造抗早抗鹽新種質(zhì)是春小麥育種的重要目標(biāo)。利用生物技術(shù)進(jìn)行種質(zhì)改良是目前公認(rèn)的最為有效的手段和方法，其中分子標(biāo)記技術(shù)不僅因?yàn)槟軌蛴行Ф鴾?zhǔn)確地進(jìn)行雜種鑒定而成為重要的輔助育種手段，而且可以通過物種多樣性測(cè)定和聚類分析比較，確定標(biāo)記目標(biāo)基因而受到學(xué)術(shù)界廣泛重視。本研究結(jié)合具體研究條件，采用APAGE技術(shù)和RAPD標(biāo)記技術(shù)對(duì)22個(gè)不同類型春小麥與小黑麥品種

2、進(jìn)行多態(tài)性分析和聚類比較，以建立小麥分子標(biāo)記輔助育種體系，為進(jìn)一步開展小麥抗性改良提供研究基礎(chǔ)和必需的技術(shù)支撐。研究結(jié)果如下:1.利用APAGE技術(shù)進(jìn)行麥醇溶蛋白譜帶分析表明，供試的22品種具有20種醇溶蛋白帶型，所有帶型共分離出30條蛋白帶，其中26條呈現(xiàn)多態(tài)性，說明供試品種具有豐富的醇溶蛋白位點(diǎn)等位變異，品種之間存在較大的遺傳差異性。聚類分析發(fā)現(xiàn)，遺傳相似系數(shù)范圍為:0.0050.996，平均值為:0.501。供試品種在相似系數(shù)為0

3、.501時(shí)可聚為四類，即早作春小麥、水地春小麥、早作小黑麥、水地小黑麥，表現(xiàn)出供試品種間極高的遺傳多樣性。2.RAPD測(cè)定穩(wěn)定性研究中，分別對(duì)模板DNAMgC1dNTPs、引物和丁agDNA聚合酶等5個(gè)方面進(jìn)行濃度梯度篩選，最終得到一套適合且相對(duì)穩(wěn)定的PGR擴(kuò)增體系其具體指標(biāo)為:在20w1體系中，模板DNA25ngMgClt5.OmmoldNTPs4.Ommol、引物和TagDNA聚合酶1.25U.3.利用單引物RAPD標(biāo)記分析結(jié)果表明

4、:100個(gè)隨機(jī)引物中的27個(gè)擴(kuò)增產(chǎn)物具有多態(tài)性。27個(gè)引物共擴(kuò)增出156條帶，其中91條帶具有多態(tài)性，每個(gè)引物可擴(kuò)增出1.10條多態(tài)性帶，平均3.4條。RAPD標(biāo)記遺傳相似系數(shù)變化范圍為:0.2350.994，平均值為0.615，表明品種間在分子水平上也存在較大遺傳變異，遺傳多樣性較高。聚類分析中，除8360的差異顯著獨(dú)立成類外，三個(gè)早作品種(小紅麥、會(huì)寧老芒麥、早地大青芒)聚在了一起，兩個(gè)外源品種690與7015也聚在一類，其它品種均

5、根據(jù)親緣關(guān)系遠(yuǎn)近被聚5類:第I類:包括兩亞類(7個(gè)水地春小麥與4個(gè)旱作春小麥)第II類:8360第lu類:153106與小品201528第N類:1533StudyonGeneticDiversityAnalysisofDifferentTypesSpringWheatwithRAPDAbstractThespringwheat(TriticumaestivumL)wasthemaincultivatedtypeofwheatinnort

6、hofChina.Creatingresistantdroughtandsaltofnewcharacterwheatwasthemainobjectiveofspringwheatbreeding.Itwasthemostefficientmeansusingthetechnologyofbiologytoimprovethecharacters.Usingthetechnologyofmolecularmarknotonlyefec

7、tivelyappraisedcrossvarietiesbutalsoanalysizedgeneticdiversity.22diferentspringwheatsandtriticaleswerecarriedoutbyRandomAmplifiedPolymorphicDNA(RAPD)analysisandAcidPolyacrylamideGelElectrophoresis(APAGE)analysisinacertai

8、nconditioninordertoestablishthemolecularmarkedassistedselectionsystemofwheatandoferthenecessarytechnologyinimprovingresistantcharacterofwheat.Theresultsshowedasfolows:LTherewere20gliadingenotypesinthe22cultivarsbyAPAGEan

9、alysis.30gliadinbandswereseparatedbyelectrophoresisand26ofthempolymorphism(amountto86.67%).Thegeneticsimilaritycoefficient(GS)basedongliadinrangedfrom0.005toO.996withanaverageof0.501.11:wasshownthattherewasabundantaberra

10、nceinthesevarities.Clusteranalysisshowedthatthecultivarscouldbeclassifiedinto4clustersatthelevelofGS0.501theyarerespectivelythespringwheatindrylandthespringwheatinahumidlandtriticaleina勿landandtriticaleinahumidland.Obvio

11、uslythecultivarshadabundantvariationandhighgeneticdiversity.2.SomeproblemsabouttherepeatabilityofRAPDwhichincludetempletconcentrationMgC12concentrationdNTPsconcentrationprimerconcentrationandTaqDNApolymeraseconcentration

12、werestudiedseparately.AsetofPCRsystemwhichwasfitforourlabandhasagoodrepeatabilitywasobtained.ThereweretempletDNA25ngMgC125.OmmoldNTps4.OmmolprimerI0amolandthermasaquaticusDNApolymerase1.25Uinthissystem.3.100arbitraryprim