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1、豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)是引發(fā)斷奶豬多系統(tǒng)衰竭綜合征(PMWS)和豬的皮炎與腎病綜合征(PDNS)等有關疾病的重要病原.為深入研究PCV2的致病機理,該研究在國內(nèi)首次建立了PCV2特異性原位雜交檢測方法.參照GenBank發(fā)表的PCV2 ORF2基因序列設計引物,利用PCR擴增得到341bp的核酸片段,用隨機引物法制備出地高辛標記的核酸探針.特異性檢測結果表明,該探針與PCV1、PRRSV、PPV、PRV等不發(fā)生反應;敏感性檢測結果表
2、明,該探針可檢測的最低DNA含量為2pg.用PCV2 BF毒株人工感染10頭40日齡長白豬,分別于感染后第3、7、14、21、42天剖殺取材,制備多聚甲醛固定石蠟包埋的組織切片,用核酸探針檢測組織中的病毒分布.結果顯示,在人工感染后第3天,仔豬的淋巴結、胸腺、肺臟、脾臟、鼻粘膜中即出現(xiàn)陽性雜交信號;第21天,肝臟、腎臟、心臟、腦、胃、回腸等組織出現(xiàn)陽性信號.在整個實驗過程中,會厭軟骨、膀胱、皮膚、肌肉等組織以及未感染對照豬組織均未檢測到
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