豬繁殖與呼吸綜合征病毒和豬偽狂犬病病毒的分離、鑒定.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒引起的一種新的、高度傳染性疾病.近年來(lái),全國(guó)各地很多豬場(chǎng)都出現(xiàn)了以母豬繁殖障礙、仔豬呼吸困難為特征的傳染病.為了弄清病因,解決生產(chǎn)實(shí)際,特此開(kāi)展了豬繁殖與呼吸綜合征病毒和豬偽狂犬病病毒的分離和鑒定工作.1 豬繁殖與呼吸綜合征病毒分離、鑒定 利用MARC-145細(xì)胞,從湖北、湖南、江西、河南、

2、浙江等地發(fā)病仔豬和流產(chǎn)胎兒的肺臟中分離到疑似PRRSV多株,并對(duì)其中一株病毒進(jìn)行了全面的鑒定.該病毒在MARC-145細(xì)胞上增殖滴度為10<'-4.39>/0.1ml,對(duì)氯仿敏感,56℃,1h完全滅活,不耐酸堿,不能被5'-碘脫氧尿核苷(IUDR)所抑制.在電鏡下,病毒粒子呈球形,有囊膜,大小約為50~65nm.能被美洲型PRRSV陽(yáng)性血清所中和,而不能被抗豬瘟病毒、豬偽狂犬病病毒、豬細(xì)小病毒、豬乙型腦炎病毒等的陽(yáng)性血清中和.為了進(jìn)一步

3、從分子生物學(xué)進(jìn)行鑒定,設(shè)計(jì)了特異性引物對(duì)病毒的囊膜蛋白基因(ORF6)進(jìn)行了RT-PCR擴(kuò)增,擴(kuò)增到大小約為500bp的片段,與預(yù)期大小相當(dāng),而陰性對(duì)照則不能擴(kuò)增出相應(yīng)大小的片段.根據(jù)以上結(jié)果,證實(shí)所分離的病毒為豬繁殖與呼吸綜合征病毒,并且屬于美洲型,命名為PRRSV HA株.2 豬繁殖與呼吸綜合征病毒ORF5和ORF7基因的克隆及序列分析 根據(jù)GenBank上PRRSV VR-2332株的核苷酸序列,設(shè)計(jì)兩對(duì)分別包含ORF5和ORF7

4、基因完整編碼區(qū)的引物.使用Blast軟件分析發(fā)現(xiàn)PRRSV HA株ORF5基因和ORF7基因與美洲型代表株VR-2332株、中國(guó)分離的Bj-4株、歐洲型代表株LV株的核苷酸同源性分別是98﹪、99﹪、705,995、99﹪、93﹪.3 豬偽狂犬病病毒的分離及初步的鑒定 從湖北宜城市某豬場(chǎng)流產(chǎn)胎兒的內(nèi)臟組織中分離到一株P(guān)RV,并進(jìn)行了初步的鑒定.通過(guò)實(shí)驗(yàn)證實(shí)所分離的病毒為PRV,命名為PRV YC株.用TCID<,50>為10<'-6.6