黑龍江省部分地區(qū)PED流行特征及病毒生物學(xué)特性研究.pdf

1、豬流行性腹瀉(Porcine epidemic diarrhea,PED)是由豬流行性腹瀉病毒(Porcineepidemic diarrhea virus,PEDV)引起的以腹瀉、嘔吐和脫水為主要臨床特征的豬消化道傳染病.該病在我國及世界各養(yǎng)豬國家廣泛分布,其對仔豬的危害嚴(yán)重,致死率高.該實(shí)驗(yàn)對黑龍江省不同地區(qū)的5個(gè)腹瀉病發(fā)生的豬場經(jīng)臨床初步診斷、實(shí)驗(yàn)室PCR技術(shù)和病原分離,確診其中的兩個(gè)豬場為豬流行性腹瀉.證明了黑龍江地區(qū)存在有豬流

2、行性腹瀉.這兩個(gè)養(yǎng)豬場哺乳仔豬發(fā)病率為72.6％和89.95％,其他年齡豬為68.07％和75％;哺乳仔豬死亡率為62.88％和81.31％;其他年齡豬為8.31％和10.37％;從發(fā)病年齡看,雖然各種年齡的豬均有發(fā)生,但死亡多在4周齡以下哺乳仔豬;發(fā)病季節(jié)均為冬春寒冷季節(jié),臨床表現(xiàn)以水樣或稀薄黃白色腹瀉為主要特征.該實(shí)驗(yàn)對PCR陽性的腹瀉糞便樣品進(jìn)行了病毒分離.糞便毒在Vero細(xì)胞上進(jìn)行連續(xù)盲傳,現(xiàn)已傳20代次.在17代之前,感染細(xì)胞

3、無明顯變化,在傳至18代時(shí),表現(xiàn)為細(xì)胞輪廓不清,細(xì)胞顆粒增多,培養(yǎng)液中死亡細(xì)胞增多.并以每隔5個(gè)代次采用RT-nestedPCR技術(shù)檢測PEDV M基因,結(jié)果表明,在第5、10、15和20等不同代次的細(xì)胞培養(yǎng)物進(jìn)行的Nested-PCR均為陽性結(jié)果,說明分離毒確已在細(xì)胞中得到了穩(wěn)定生長.該細(xì)胞適應(yīng)病毒的獲得為我國PEDV地方分離株血清學(xué)、免疫學(xué)、病原生物學(xué)以及疫苗研制等提供了重要的物質(zhì)基礎(chǔ).該研究根據(jù)Genebank中PEDV CV77

4、7和Br1/87 M基因的保守序列設(shè)計(jì)引物,通過RT-PCR和Nested-PCR方法在中國首次從患病豬的糞便中擴(kuò)增獲得了中國地方株LJB/03 M全基因序列.將其插入克隆載體質(zhì)粒pMD18-T,并進(jìn)行測序.測序結(jié)果顯示LJB/03株M基因核苷酸序列全長681bp,含有完整的開放閱讀框架,編碼226個(gè)氨基酸,將其核苷酸序列及推導(dǎo)的氨基酸序列與已發(fā)表Br1/87和CV777兩個(gè)國外同源標(biāo)準(zhǔn)毒株M基因進(jìn)行比較,核苷酸序列與Br1/87比較分

5、別在37、47、138、179、192、213、269、285、348、448、579、597、618、629等14個(gè)核苷酸存在差異,同源性為97.94％;與CV777比較分別在37、47、138、179、192、213、269、285、348、579、597、618、629等13個(gè)核苷酸存在差異,同源性為98.09％;推導(dǎo)的氨基酸序列與Br1/87株和CV777株M基因相比,分別有5個(gè)和4個(gè)氨基酸差異,同源性分別為97.79％和98.