鹽脅迫下三角梅葉片相關(guān)生理變化及SOD基因的克隆分析.pdf

1、三角梅（Bougainvillea spp.）是我國南方地區(qū)重要的園林綠化樹種，本研究以一年生三角梅扦插苗伊麗莎白·安格斯(Bougainvillea glabra‘Elizabeth Angus’，俗稱紫花三角梅)和柔森卡(Bougainvillea×buttiana‘Rosenka’，俗稱水紅三角梅)為材料，用不同的鹽濃度分別對2個品種三角梅進行脅迫處理，測定了三角梅2個品種葉片的在鹽脅迫過程中電解質(zhì)外滲率、MDA、脯氨酸、保護酶等

2、相關(guān)生理變化，探討三角梅耐鹽性指標(biāo)變化及差異；用液相色譜法對三角梅葉片中一些內(nèi)源激素進行測定，研究三角梅在鹽脅迫過程中激素含量的變化與鹽脅迫的關(guān)系；同時用RACE的方法對三角梅葉片中SOD基因家族進行比較系統(tǒng)的克隆，為三角梅抗逆性研究提供分子生物學(xué)基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下：
　　1.以一年生紫花三角梅和水紅三角梅扦插苗為材料，用0.2％-0.6%的鹽分別對2個品種三角梅進行脅迫處理，結(jié)果表明，三角梅葉片的膜穩(wěn)定性、保護酶活性、滲透調(diào)

3、節(jié)物質(zhì)含量，隨處理時間和濃度的變化而規(guī)律變化。水紅三角梅葉片中電解質(zhì)外滲率、丙二醛、脯氨酸含量明顯增加，并隨時間及鹽濃度的上升而增大，可溶性蛋白含量表現(xiàn)為先升后降，SOD的POD活性不斷增高，CAT活性降低；紫花三角梅則表現(xiàn)為電解質(zhì)外滲率、丙二醛、脯氨酸含量增加，并隨時間及鹽濃度的上升而增大，可溶性蛋白含量先增大后減小的趨勢，SOD的POD活性先增高后下降，CAT活性降低。在脅迫過程中，紫花三角梅的上述各指標(biāo)的變化較水紅三角梅敏感，其上

4、升下降的幅度更大，變化大于水紅三角梅。因此電解質(zhì)外滲率、丙二醛、脯氨酸與三角梅耐鹽性密切相關(guān)。
　　2.利用液相色譜法對鹽脅迫過程中三角梅葉片激素含量的變化進行了測定。水紅三角梅葉片中ABA含量在鹽脅迫下增大，0.4%和0.6%的鹽處理下極顯著性增大，GA3含量表現(xiàn)為先增長后下降的趨勢，IAA含量不斷減少；紫花三角梅ABA、GA3和IAA含量變化與水紅三角梅相似，在0.6%的鹽處理下紫花三角梅中GA3的含量遠大于水紅三角梅，形態(tài)學(xué)

5、表現(xiàn)為多數(shù)葉片黃化脫落。因此認(rèn)為GA3的含量的變化與三角梅耐鹽性關(guān)系密切。
　　3.采用同源克隆的方法，利用RACE技術(shù)對三角梅SOD基因家族不同類型基因進行cDNA的克隆，結(jié)果如下：
　　CSD（Cu/ZnSOD）基因的克?。汗驳玫酵暾馁|(zhì)胞型CSD序列共8個，其中cyCSD1型4個，具有相同的ORF區(qū)，長585bp，編碼195個氨基酸，
　　3’UTR長度為147bp-237bp不等，5’UTR長度均為55bp；c

6、yCSD2型4個，具有相同的ORF區(qū)，長543bp，編碼180個氨基酸，3’UTR長度為147bp-237bp不等，5’UTR長度均為43bp。葉綠體型CSD1個，僅獲得其保守區(qū)域部分片段，長428bp。通過Blast在線比對分析，cyCSD與菠菜質(zhì)胞型Cu/ZnSOD相似度84%、冰葉日中花質(zhì)胞型Cu/ZnSOD相似度82%，chCSD與墻生藜葉綠體Cu/ZnSOD相似度89%、與鹽角草葉綠體Cu/ZnSOD相似度87%，認(rèn)為兩者均是

7、三角梅的Cu/ZnSOD序列。
　　FSD（FeSOD）基因的克隆：共得到葉綠體型FSD片段一個，長841bp。經(jīng)在線blast比對分析，與Genbank上已登陸的葡萄和龍眼FSD的相似度分別達到85%和78%，認(rèn)為是三角梅的FSD序列。
　　MSD（MnSOD）基因的克?。汗驳玫酵暾木€粒體型MSD序列全長共3條，具有相同的ORF，ORF長度為711bp，編碼236個氨基酸，3’UTR長度282bp-314bp，5’UTR