球蘭種質(zhì)資源遺傳多樣性的ISSR分析及組培技術(shù)初步研究.pdf

1、球蘭（Hoya carnosa R. Br），蘿摩科球蘭屬植物，起源于東南亞及澳洲地區(qū)。已有研究表明，球蘭對(duì)不同環(huán)境具有優(yōu)良的適應(yīng)性，同時(shí)具有較高的觀賞價(jià)值和藥用價(jià)值。然而，目前關(guān)于球蘭種質(zhì)資源遺傳背景及組織培養(yǎng)技術(shù)的研究較少，嚴(yán)重制約了球蘭新品種選育及大規(guī)模工廠化生產(chǎn)。鑒于此，本試驗(yàn)采用ISSR分子標(biāo)記技術(shù)結(jié)合NTSYS等軟件對(duì)福建本地及東南亞引進(jìn)的多份球蘭種質(zhì)資源進(jìn)行了遺傳多樣性分析，同時(shí)對(duì)球蘭組織培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行了研究，以期為球蘭種質(zhì)

2、資源的進(jìn)一步開發(fā)利用、藥用成分研究及大規(guī)模生產(chǎn)提供科學(xué)依據(jù)和技術(shù)支撐。試驗(yàn)結(jié)果如下：
　　1球蘭種質(zhì)資源遺傳多態(tài)性分析
　　利用ISSR分子標(biāo)記技術(shù)從42條ISSR隨機(jī)引物中篩選出12條擴(kuò)增條帶清晰、多態(tài)性好的引物對(duì)43份球蘭種質(zhì)資源進(jìn)行ISSR-PCR分析。獲得的球蘭DNA指紋圖譜中，12條引物共擴(kuò)增69個(gè)條帶，擴(kuò)增片段大小介于200-2500 bp，且均為多態(tài)性條帶，多態(tài)性比率達(dá)到100％，可見(jiàn)這些球蘭種質(zhì)資源之間的遺傳

3、多態(tài)性極為豐富。
　　2球蘭種質(zhì)資源遺傳相似系數(shù)分析
　　采用NTSYS2.10e對(duì)43份球蘭樣品的遺傳相似系數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，該球蘭種質(zhì)資源個(gè)體之間的遺傳相似系數(shù)介于0.464-0.797，進(jìn)一步說(shuō)明不同球蘭種質(zhì)資源之間的遺傳多樣性豐富。其中彩葉球蘭（Hoya carnosa）與刺球蘭（Hoya acicularis）之間的遺傳相似系數(shù)最小，為0.464，即二者之間的遺傳距離最大。而來(lái)自同一個(gè)種的貝拉內(nèi)錦（Hoya b

4、ella）和貝拉外錦（Hoya bella）之間的遺傳相似系數(shù)最大，達(dá)到0.797，兩份種質(zhì)資源之間的親緣關(guān)系最近。
　　3基于遺傳距離的球蘭種質(zhì)資源遺傳聚類分析
　　基于遺傳距離采用NTSYS2.10e對(duì)43份球蘭種質(zhì)資源進(jìn)行遺傳聚類分析。根據(jù)獲得的聚類樹狀圖，設(shè)定閾值（GS）為0.527時(shí)，球蘭種質(zhì)資源可分為兩個(gè)大組，其中來(lái)源于福建本地的彩葉球蘭（Hoya carnosa）和形態(tài)學(xué)差異較大的刺球蘭（Hoya acicul

5、aris）歸為一組（A組），而其他品種歸為一組（B組）。當(dāng)閾值（GS）取0.545時(shí)，A大組中的兩份不同球蘭進(jìn)一步分開；而當(dāng)閾值（GS）為0.574時(shí)，B大組分為B-a與B-b兩個(gè)亞組，其中卷葉類型的卷葉內(nèi)錦（Hoya compacta var in）和卷葉外錦（Hoya compacta var out）獨(dú)立為一個(gè)亞組，而其他品種聚為另一亞組。遺傳聚類分析結(jié)果與不同球蘭種質(zhì)資源的地理分布或形態(tài)學(xué)差異一致，也進(jìn)一步證明了該聚類結(jié)果具有較

6、高的準(zhǔn)確性。
　　4球蘭愈傷組織的誘導(dǎo)與增殖
　　以心狀球蘭葉片為試驗(yàn)材料，研究不同培養(yǎng)基對(duì)球蘭愈傷組織誘導(dǎo)、增殖及分化的影響。研究結(jié)果表明，MS+6-BA2.0 mg/L+NAA0.5 mg/L+2,4-D1.0 mg/L+GA l.0 mg/L+蔗糖3%的培養(yǎng)基中愈傷組織的誘導(dǎo)效果最好，誘導(dǎo)率為70.8%；而誘導(dǎo)獲得的球蘭愈傷組織在 MS+6-BA2.0 mg/L+NAA0.5 mg/L+2,4-D1.0 mg/L+GA