豬繁殖與呼吸綜合征RT-PCR檢測方法的建立與應用.pdf

1、為了解豬繁殖與呼吸綜合征(PRRS)在廣西區(qū)的流行情況,本研究根據 GenBank中所發(fā)表的PRRSV美洲型經典株、高致病性變異株及歐洲株的Nsp2基因序列,設計并合成了兩對特異性引物,建立了兩種RT-PCR檢測方法。第一種方法利用引物Eur7/Eur8從PRRSV的美洲型和歐洲型毒株中分別擴增出666bp和572bp的片段;第二種方法利用引物Pa/Pb從PRRSV美洲型的經典株和高致病性變異株中擴增出523bp和433bp片段。實驗驗

2、證,這兩種方法對豬瘟病毒、豬傳染性胃腸炎病毒、豬流行性腹瀉病毒、豬流感病毒、口蹄疫 A型、O型、亞 I型病毒擴增結果均為陰性;引物Eur7/Eur8能檢測出的最小 RNA濃度為7.68×10-3μg/ml,引物 Pa/Pb為7.76×10-5μg/ml。實驗證明建立的兩種 RT-PCR方法具有良好的特異性、敏感度和重復性,第一種方法能快速、準確的檢測并鑒別出PRRSV美洲型和歐洲型毒株,第二種方法可以區(qū)分美洲型經典株和高致病性變異株,兩

3、種方法聯合使用可以作為PRRSV臨床診斷、病料檢測和流行病學調查的有效方法。
　　應用所建立的兩種RT-PCR方法對2012年2月至2014年1月兩年間廣西區(qū)內11個地市,76個豬場的2355份病料進行了病原學檢測。檢測結果顯示,共有324份PRRSV陽性,總陽性率為13.76％,其中美洲型經典株77份,陽性率為為3.27%,變異株247份,陽性率為10.49%,未檢測到歐洲株。11個地市中除防城港外均有檢測到PRRSV,且大部分