白術真菌病害的分離鑒定及其根際促生菌的篩選.pdf

1、白術(AtractylodesmacrocephalaKoidz.)屬菊科(Compositae)蒼術屬（Atractylodes），性溫，味甘、苦，具有健脾益氣、燥濕利水、止汗、安胎的功效，是著名道地藥材“浙八味”成員之一。主要分布在浙江、安徽、江西、湖南、四川、湖北等地。白術忌連作，種過的地需間隔5年以上才能再種，然而，隨著市場對白術需求的增加，連作現(xiàn)象在白術種植基地非常普遍。連作后的白術極易遭受病害侵襲，病害發(fā)生可導致白術減產(chǎn)甚至

2、絕收。為了減少損失，當?shù)厮庌r(nóng)通常選擇施用農(nóng)藥化肥解決白術的病害和生長問題，但是嚴重影響了藥材的品質(zhì)及其道地性。
　　 本文以浙江省磐安縣園塘林場內(nèi)的連作白術為研究對象，調(diào)查了白術的發(fā)病情況，并分離鑒定了致使病害發(fā)生的病原菌，另外進行了白術土著根際促生菌(PlantGrowth-PromotingRhizobacteria，PGPR)的篩選工作，以期尋找到有效的PGPR菌株。主要研究結(jié)果如下:
　　 (1)白術真菌病害調(diào)查

3、情況
　　 通過田間調(diào)查取樣，初步確定了白術根莖腐爛病和葉斑病2種病害。根莖腐爛病是連作白術最常見病害之一，發(fā)病后植株葉片逐漸枯萎凋落、根莖開始腐爛，直至整株死亡。葉斑病發(fā)病初期葉片出現(xiàn)圓形或不規(guī)則斑點，之后病斑逐漸蔓延至整株葉片，影響植株正常的光合作用，而導致白術死亡。
　　 (2)白術真菌病害病原菌分離與鑒定
　　 依據(jù)形態(tài)學觀察及分子鑒定方法，確定白術根莖腐爛病病原菌為尖孢鐮刀菌（Fusariumoxysp

4、orum）和半裸鐮刀菌（Fusariumincarnatum），白術葉斑病病原菌為長柄鏈格孢菌（Alternarialongipes），A.longipes為首次在白術上發(fā)現(xiàn)。
　　 (3)白術土著PGPR的分離與篩選
　　 從根系土壤樣品中共分離純化得到21株細菌，編號B1-B21。根據(jù)體外拮抗能力、是否解磷、是否產(chǎn)生長素(IAA)指標，篩選PGPR菌株。根據(jù)拮抗能力指標篩選到11株具有體外拮抗能力的菌株，分別是B1、

5、B2、B4、B5、B8、B10、B11、B12、B17、B19和B21。其中B11菌株對病原菌F.oxysporum和F.incarnatum的生長抑制率最為顯著，對F.incarnatum最高抑菌率達70.27％。根據(jù)是否有解磷能力篩選到8株解磷細菌，分別是B2、B10、B11、B12、B14、B15、B17和B21，其中B15菌株的解磷能力最強，黃色透明圈直徑D與菌落直徑d比為2.27。根據(jù)是否產(chǎn)生IAA篩選到15株細菌，分別是B1

6、、B5、B6、B7、B9、B10、B12、B13、B14、B15、B16、B18、B19、B20和B21,其中B5菌株產(chǎn)IAA濃度為55.951mg/L。
　　 (4)白術PGPR分子鑒定
　　 測序結(jié)果顯示21株菌株中，B1菌株為泛菌屬（Pantoeaspp.）;B2、B10、B12、B17、B19和B21為芽孢桿菌屬（Bacillusspp.），其中B10菌株為枯草芽孢桿菌（Bacillussubtilis），B12