黃花蒿種質資源遺傳多樣性研究.pdf

1、黃花蒿（Artemisia annua L.）別名青蒿，為中醫(yī)傳統(tǒng)用藥。其有效成分青蒿素是目前治療惡性瘧疾唯一的真正有效藥物。我國青蒿素的生產(chǎn)主要靠野生資源，但現(xiàn)有野生資源遠不能滿足市場對青蒿素用藥不斷增長的需求。本研究以黃花蒿為研究對象，采用ISSR分子標記技術，對黃花蒿野生種群及其子代的遺傳多樣性水平和群體遺傳結構進行檢測和比較，闡明其遺傳變異的水平、空間上的分布特征和遺傳的穩(wěn)定性。同時，結合各種質的有效成分，對黃花蒿種質進行綜合評

2、價，為尋找黃花蒿優(yōu)良種質資源提供參考依據(jù)，為黃花蒿的良種選育和開發(fā)利用提供理論參考。研究結果如下:
　　 1、利用正交設計和單因素試驗相結合的方法，對黃花蒿ISSR-PCR反應條件進行優(yōu)化，確立黃花蒿最佳反應體系，即25μL的體系中含dNTPs0.20mmol/L，引物0.80μmol/L，Mg2+1.60mmol/L，Taq DNA聚合酶1.00U，模板DNA80.00ng，10×Buffer2.50μL。最佳反應程序為:94

3、℃預變性5min;94℃變性30s，50.0～57.8℃退火45s，72℃延伸1.5min，38個循環(huán);72℃再延伸7min;4℃保存。
　　 2、采用篩選的13條引物對13個黃花蒿野生種群進行ISSR-PCR擴增。野生種群共擴增出117條帶，其中多態(tài)位點107個，物種水平多態(tài)位點百分率(PPL)為91.45％，種群水平多態(tài)位點百分率(PPL)平均值為69.62％，Nei's基因多樣性指數(shù)(H)為0.3316，Shannon信息

4、指數(shù)(I)為0.4999，說明野生黃花蒿具有較高的遺傳多樣性水平，遺傳分化系數(shù)(Gst)為0.1749，遺傳變異有82.51％發(fā)生在種群內的不同個體間，17.49％發(fā)生在不同種群間，基因流(Nm)為2.3585。廣西玉林(YL)和浙江杭州(HZ)野生種群的遺傳多樣性水平較高，應作為重點保護種群;在建立種質圃時應盡量多采集植物個體進行保存。
　　 3、通過對黃花蒿野生種群的地理距離和遺傳距離進行相關性分析，結果表明二者沒有顯著相關

5、性。另外，黃花蒿野生種群的青蒿素含量與遺傳距離的相關性也不顯著。
　　 4、與親代（野生種群）相比，黃花蒿子代種群的遺傳多樣性參數(shù)值低于其野生種群;河南鄭州(ZZ)和廣東英德(YD)種群親、子代間的差異小，遺傳穩(wěn)定性較好，但其青蒿素含量遠未達到工業(yè)化生產(chǎn)要求。綜合遺傳穩(wěn)定性和青蒿素含量兩方面考慮，建議將廣西天峨種群(TE)作為人工栽培采種的優(yōu)良種群。
　　 5、13個黃花蒿野生種群種質材料可聚為兩大類群:廣西北海種群(B