溶藻弧菌肽聚糖對凡納濱對蝦常用免疫指標(biāo)、蝦青素含量和LvLT基因表達(dá)的影響.pdf

1、本實驗從溶藻弧菌中提取得到其多糖成分肽聚糖，并對肽聚糖的結(jié)構(gòu)和化學(xué)組分進(jìn)行測定，進(jìn)一步證實所得到的成分為肽聚糖，并用所提取得到的肽聚糖對凡納濱對蝦進(jìn)行免疫刺激，對凡納濱對蝦常用免疫指標(biāo)、機體內(nèi)蝦青素的含量以及 C-型凝集素LvLT基因的表達(dá)進(jìn)行測定，同時分析所測定的免疫指標(biāo)與蝦青素含量、凝集素LvLT基因表達(dá)之間的相關(guān)性，具體研究結(jié)果如下：
　　1.從溶藻弧菌中提取肽聚糖的得率為6.43％，肽聚糖的含量為98.1%，在進(jìn)一步對其化

2、學(xué)成分和結(jié)構(gòu)測定的研究表明：肽聚糖中蛋白質(zhì)含量為38.2%，總糖的含量為34.4%，總脂的含量為2.8%；其結(jié)構(gòu)從傅里葉紅外光譜圖可以看出在3283.32 cm-1，2962.33 cm-1，2929.68 cm-1，2874.85 cm-1，1625.46 cm-1，1532.9 cm-1，1171.61 cm-1，1046.73 cm-1出現(xiàn)吸收峰，具備了肽聚糖相應(yīng)的特征吸收峰。
　　2.用濃度為0.05mg/mL、0.1mg

3、/mL和0.15mg/mL的溶藻弧菌肽聚糖對凡納濱對蝦進(jìn)行注射免疫刺激，并對其常用免疫指標(biāo)和免疫保護率進(jìn)行測定，結(jié)果表明：溶藻弧菌肽聚糖對血清中血細(xì)胞數(shù)量、酚氧化酶活力(PO)、一氧化氮合成酶活力(NOS)、超氧化物歧化酶活力(SOD)有極顯著性影響(P<0.01)，其中0.05mg/mL組、0.1mg/mL組和0.15mg/mL組血細(xì)胞數(shù)量分別在24h、6h和6h達(dá)到最大值，PO活力分別在72h、72h和96h達(dá)到最大值，NOS活力在

4、12h、72h和24h達(dá)到最大值，SOD活力在48h、72h和24h達(dá)到最大值；各處理組在出現(xiàn)最大值之后，隨著時間延長而逐漸趨于對照組的水平；免疫保護率0.05mg/mL組為40.0%，0.1mg/mL組為53.33%，0.15mg/mL組為66.67%，免疫保護率隨著濃度的增加而增大。
　　3.用濃度為0.5mg/mL、1.0mg/mL和1.5mg/mL的溶藻弧菌肽聚糖對凡納濱對蝦進(jìn)行浸泡免疫刺激，并對其常用的免疫指標(biāo)和免疫保護

5、率進(jìn)行測定，結(jié)果表明：溶藻弧菌肽聚糖對血清中血細(xì)胞數(shù)量、酚氧化酶活力(PO)、一氧化氮合成酶活力(NOS)、超氧化物歧化酶活力(SOD)有顯著性(P<0.05)的差異影響；其中0.5mg/mL組、1.0mg/mL組和1.5mg/mL組血細(xì)胞數(shù)量分別在48h、48h和24h出現(xiàn)最大值，PO活力分別在48h、24h和96h出現(xiàn)最大值，NOS活力分別在48h、24h和48h出現(xiàn)最大值，SOD活力分別在12h、24h和48h出現(xiàn)最大值；各處理組

6、在出現(xiàn)最大值之后，也隨著時間延長而逐漸趨于對照組的水平；其免疫保護率0.5mg/mL組為33.33%，1.0mg/mL組為36.67%，1.5mg/mL組為50.00%，免疫保護率隨著濃度的增加而增大。
　　4.用肽聚糖對凡納濱對蝦進(jìn)行免疫刺激后，對肝胰腺中C型凝集素LvLT基因表達(dá)的情況進(jìn)行測定，其實驗結(jié)果顯示：注射和浸泡各個濃度處理組都出現(xiàn)了極顯著性差異影響（P﹤0.01），其中注射濃度為0.05mg/mL組、0.1mg/mL

7、組和0.15mg/mL組基因上調(diào)出現(xiàn)最大值所需時間分別為24h、12h和6h，各組在出現(xiàn)最大值后都有逐漸下調(diào)的趨勢；浸泡濃度為0.5mg/mL組、1.0mg/mL組和1.5mg/mL組基因上調(diào)出現(xiàn)最大值所需時間分別是12h、24h和6h，各組在出現(xiàn)最大值后也同樣有逐漸下調(diào)的趨勢，但是在120h后有出現(xiàn)上調(diào)的趨勢。
　　5.用Spearman相關(guān)系數(shù)對凡納濱對蝦C-型凝集素LvLT基因表達(dá)與各測定的免疫指標(biāo)的相關(guān)性進(jìn)行分析，分析的結(jié)

8、果顯示：注射組Spearman相關(guān)系數(shù)，LvLT基因表達(dá)與血細(xì)胞數(shù)量、SOD活力和PO活力相關(guān)性差異極顯著（P﹤0.01），NOS活力差異不顯著。浸泡組Spearman相關(guān)系數(shù)，LvLT基因表達(dá)與血細(xì)胞數(shù)量、NOS活力、PO活力以及SOD活力相關(guān)性差異極顯著（P﹤0.01）；說明了LvLT基因表達(dá)與血細(xì)胞數(shù)量，SOD活力與PO活力關(guān)系很密切。
　　6.用肽聚糖對凡納濱對蝦進(jìn)行免疫刺激后，蝦青素含量變化情況如下：注射和浸泡各個濃度組

9、蝦青素含量變化與對照組相比出現(xiàn)了極顯著性的變化(P﹤0.01)；其中注射各處理組在24h內(nèi)上升到最大值，然后逐漸的減小，0.05mg/mL組和0.15mg/mL組在96h后出現(xiàn)上升的趨勢，而0.1mg/mL組在120h后出現(xiàn)上升的趨勢，各處理組的含量都相對比對照組的低，其變化的趨勢與SOD活力的變化趨勢相似；浸泡濃度為0.5mg/mL組、1.0mg/mL組和1.5mg/mL組分別在24h、48h和48h出現(xiàn)最大值，然后逐漸減小，在120

10、h后出現(xiàn)上升的趨勢。
　　7.蝦青素含量與各測定的免疫指標(biāo)之間關(guān)系進(jìn)行相關(guān)性分析結(jié)果顯示：注射組Spearman相關(guān)系數(shù)蝦青素的含量與SOD活力、PO活力和LvLT基因表達(dá)差異極顯著(P﹤0.01)，與血細(xì)胞數(shù)量差異顯著(P﹤0.05)，與 NOS活力不顯著；浸泡組Spearman相關(guān)系數(shù)蝦青素的含量與 NOS活力和 LvLT基因表達(dá)差異極顯著(P﹤0.01)，與 PO活力差異顯著(P﹤0.05)，與 SOD活力和血細(xì)胞數(shù)量不顯著