人參、西洋參和甘草組織培養(yǎng)研究.pdf

1、人參（Panax ginseng C.A.Meyer）、西洋參（Panax quinquefolium L.）和甘草（Glycyrrhiza uralensis Fisch.）屬于大宗類藥材，應(yīng)用十分廣泛。本文建立了人參不定根、西洋參細(xì)胞和甘草細(xì)胞培養(yǎng)體系，并進(jìn)行了反應(yīng)器培養(yǎng)研究。
　　本文以5年生人參根為外植體誘導(dǎo)出愈傷組織，在附加IBA5mg·L-1的MS培養(yǎng)基中，由愈傷組織誘導(dǎo)得到人參不定根。采用5L近球型鼓泡式反應(yīng)器培養(yǎng)人

2、參不定根40天后，生長(zhǎng)速率達(dá)到50倍?？傇碥蘸吭谂囵B(yǎng)第30天達(dá)到最大值。利用LC-MS鑒定了人參不定根中8種人參皂苷單體（Rg1、Re、Ro、Malonyl-Rb1、Rb1、Rc、Rb2和Rd）；人參不定根培養(yǎng)體系生長(zhǎng)速度較快，皂苷合成能力也有明顯優(yōu)勢(shì)。利用誘導(dǎo)子10mg/LMJ培養(yǎng)人參不定根24h后，人參皂苷含量顯著提高，其中以二醇型皂苷尤為顯著，這一結(jié)果與SE,DS,P450基因表達(dá)密切相關(guān)?？寡趸钚匝芯勘砻鳎喝藚⒉欢ǜ性碥蘸?/p>

3、多糖的DPPH抑制率均高于栽培人參。不定根中皂苷含量為60mg·L-1時(shí)，DPPH抑制率為96.03％。
　　以5年生栽培西洋參為外植體誘導(dǎo)出愈傷組織，將愈傷組織加入到附加2mg·L-12,4-D，0.25mg·L-1KT的MS培養(yǎng)基中誘導(dǎo)得到懸浮細(xì)胞。5L反應(yīng)器培養(yǎng)中，西洋參細(xì)胞的生長(zhǎng)和活性成分含量基本在第21天達(dá)到最大值，這一過(guò)程與營(yíng)養(yǎng)成分消耗相關(guān)。添加混合誘導(dǎo)子后（100mg·L-1LH和2mg·L-1MJ），細(xì)胞的生物量和

4、多糖含量沒(méi)有顯著變化，而皂苷含量要高于添加單一誘導(dǎo)子的處理組。第16天補(bǔ)加30g·L-1蔗糖后，細(xì)胞干重生長(zhǎng)率以及多糖含量均高于對(duì)照組，多糖產(chǎn)率在第21天達(dá)到最大值（1.608g/L），為對(duì)照組的1.96倍。西洋參兩步培養(yǎng)法獲得了較高的皂苷產(chǎn)率（31.52mg·L-1）和多糖產(chǎn)率（1.72g·L-1），分別是對(duì)照組的4.34倍和2.1倍。西洋參細(xì)胞中鑒定出了4種成分，分別為Rg1、Re、Rf和Rb1。較高的多糖含量是西洋參懸浮細(xì)胞的顯著

5、優(yōu)勢(shì)，但皂苷含量較低?？寡趸钚匝芯勘砻鳎何餮髤⒓?xì)胞中皂苷的DPPH抑制率（55.72%）高于栽培西洋參，栽培西洋參和細(xì)胞中多糖的DPPH抑制率均較低。
　　以甘草下胚軸為外植體誘導(dǎo)出愈傷組織，將愈傷組織加入到附加1.0mg·L-12,4-D,1.0mg·L-1NAA,0.2mg·L-16-BA的MS培養(yǎng)基中誘導(dǎo)得到懸浮細(xì)胞。采用5L近球型鼓泡式反應(yīng)器培養(yǎng)甘草細(xì)胞20天后，干重生長(zhǎng)率達(dá)到最大值。三萜皂苷和黃酮分別在培養(yǎng)第10天和1

6、5天達(dá)到最大值。采用10L近球型鼓泡反應(yīng)器培養(yǎng)18天后，甘草懸浮細(xì)胞生長(zhǎng)率為10.86倍。甘草細(xì)胞中鑒定出了5種成分，分別為甘草苷、甘草皂苷B、甘草皂苷J(rèn)2、甘草酸和甘草皂苷B2；甘草細(xì)胞中三萜類成分較少且甘草酸含量較低，甘草黃酮的成分和含量與栽培甘草接近。甘草細(xì)胞中多糖含量為11.7%，高于栽培甘草。抗氧化活性研究表明：當(dāng)黃酮濃度為500mg·L-1時(shí)，栽培甘草和甘草細(xì)胞的DPPH抑制率分別為93.98%和100%。兩種材料中甘草多糖