豬繁殖與呼吸綜合征病毒不同變異株RT-PCR鑒別診斷方法的建立及流行病學(xué)調(diào)查.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征(porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS)是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndromevirus，PRRSV)引起的一種高度傳染性疾病，可導(dǎo)致妊娠母豬流產(chǎn)、早產(chǎn)、死胎、木乃伊胎等繁殖性能障礙以及各年齡段豬的呼吸系統(tǒng)功能障礙。
　　2006年我國(guó)發(fā)生的“豬高熱綜合征”(porcin

2、e high fever syndrome，PHFS)，經(jīng)鑒定其病原為NSP2基因高變區(qū)發(fā)生了不連續(xù)的90bp缺失的高致病PRRSV(HP-PRRSV)。最新研究表明高致病性PRRSV除具有不連續(xù)90bp的缺失情況以外，還在與本缺失區(qū)域相近的位置存在有36bp或57bp的缺失情況（以下將這幾種缺失情況分別稱為90bp缺失、36bp缺失和57bp缺失）。本研究建立一種鑒別不同變異株的RT-PCR方法，用該方法對(duì)目前PRRSV不同變異毒株的

3、流行情況進(jìn)行調(diào)查研究，以摸清臨床PRRSV變異毒株的流行情況。
　　根據(jù)本實(shí)驗(yàn)室的研究結(jié)果及GenBank上已公布的序列，設(shè)計(jì)引物，其產(chǎn)物為:a.經(jīng)典毒株未發(fā)生任何堿基缺失，擴(kuò)增條帶大小為300bp;b.部分高致病性PRRSV具有不連續(xù)的90bp的堿基缺失，擴(kuò)增條帶大小為210bp;c.另外一部分PRRSV存在連續(xù)的57bp缺失的情況，擴(kuò)增條帶大小為153bp，利用本試驗(yàn)方法對(duì)豬瘟病毒、偽狂犬病毒、圓環(huán)病毒、流行性腹瀉病毒、傳染性

4、胃腸炎病毒進(jìn)行特異性試驗(yàn)驗(yàn)證，利用本方法對(duì)山東省多個(gè)地區(qū)的樣品進(jìn)行流行性病學(xué)調(diào)查，以了解PRRSV經(jīng)典株及不同缺失情況的高致病株的流行情況。本研究共對(duì)182份樣品進(jìn)行了檢測(cè)，其中有84份病料樣品和98份血清樣品。
　　結(jié)果表明，成果建立鑒別不同變異株的RT-PCR方法，其特異性試驗(yàn)、重復(fù)性試驗(yàn)良好，可檢測(cè)經(jīng)典株P(guān)RRSV、HP-PRRSV及混合感染情況下的最低cDNA濃度為0.01ng/ul、0.05ng/ul、2.1ng/ul。

5、運(yùn)用所建立套式PCR檢測(cè)方法對(duì)182份樣品進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果表明其中有176份樣品擴(kuò)增結(jié)果為陽性。在這176份陽性樣品中，確定為PRRSV經(jīng)典毒株的共有2份，占陽性總樣品數(shù)的1.1％;其中有81份樣品僅檢測(cè)到不連續(xù)的90bp缺失的高致病性PRRSV，占陽性樣品數(shù)的46％;僅有8份樣品檢測(cè)到有連續(xù)57bp缺失的高致病性PRRSV的，占陽性樣品數(shù)的4.5％;90bp缺失和57bp缺失的樣品有84份，占陽性樣品數(shù)的47.7％;僅有1份樣品存在90