對(duì)蝦餌料生物攜帶WSSV的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估及紅肉河藍(lán)蛤?qū)Ψ布{濱對(duì)蝦抗病力的影響.pdf

1、對(duì)蝦白斑綜合征（white spot syndrome，WSS）是對(duì)蝦養(yǎng)殖中最主要的病毒性疾病，因其高傳播性、高致病性、高死亡率，對(duì)對(duì)蝦產(chǎn)業(yè)的發(fā)展造成了巨大的阻礙。目前為止，尚缺乏有效的治療方法，一般采取以防為主的策略。因此，建立高效、健康的生態(tài)養(yǎng)殖模式和提高對(duì)蝦自身的抗病力是有效應(yīng)對(duì)WSSV感染和傳播的重要手段。天然餌料生物被認(rèn)為能夠提高對(duì)蝦的抗病力，紅肉河藍(lán)蛤的研究尚未見(jiàn)報(bào)道；并且天然餌料生物也存在攜帶和傳播WSSV的風(fēng)險(xiǎn)，關(guān)于攜帶

2、的含量及強(qiáng)度還未有研究。所以，本論文針對(duì)上述問(wèn)題主要設(shè)計(jì)了以下實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：
　　1、北方沿海地區(qū)不同季節(jié)餌料生物攜帶WSSV的情況及傳播風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估
　　本實(shí)驗(yàn)于2011年9月以及2012年4月、7月、9月，分4次分別對(duì)北方遼寧、天津、河北、山東、江蘇“四省一市”的大連、漢沽、唐山、膠州、東營(yíng)、海陽(yáng)、連云港7個(gè)地區(qū)的鉤蝦、蜾蠃蜚、藍(lán)蛤、擬沼螺、鹵蟲、紅線蟲等對(duì)蝦餌料生物進(jìn)行樣品采集，采用Taqman熒光定量PCR方法檢測(cè)餌料生物攜

3、帶WSSV含量。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，北方7個(gè)地區(qū)對(duì)蝦餌料生物攜帶WSSV是普遍存在的，所有餌料生物均攜帶病毒，但是物種之間存在明顯差異。沙蠶攜帶WSSV量最高，藍(lán)蛤最低，擬沼螺攜帶WSSV量略高于藍(lán)蛤，但都在同一數(shù)量級(jí)；蜾蠃蜚攜帶WSSV量高于鉤蝦，鹵蟲攜帶較低量的WSSV。各地區(qū)餌料生物攜帶WSSV量隨季節(jié)呈現(xiàn)變化規(guī)律，7月份病毒量最高，4月與9月較低。通過(guò)對(duì)餌料生物攜帶WSSV含量的檢測(cè)，初步劃分了4個(gè)等級(jí)（WSSV量單位為c

4、opy/mg tissue）：1級(jí)0～103為潛伏感染；2級(jí)104～105為中度感染；3級(jí)106～107為重度感染；4級(jí)108及以上WSSV爆發(fā)。本研究中所有餌料生物在4月份攜帶WSSV量為102和103數(shù)量級(jí)，為1級(jí)輕度潛伏感染狀態(tài)；7月份為104或105數(shù)量級(jí)，為2級(jí)中度感染狀態(tài)；9月份為103或104數(shù)量級(jí)，部分餌料生物為1級(jí)輕度潛伏感染，部分餌料生物為2級(jí)中度感染。
　　2、投喂紅肉河藍(lán)蛤?qū)Ψ布{濱對(duì)蝦生長(zhǎng)、免疫指標(biāo)和抗病力

5、的影響
　　以凡納濱對(duì)蝦（Litopenaeus vannamei）為研究對(duì)象，設(shè)計(jì)了飼料組、藍(lán)蛤組、混合組及勻漿組4個(gè)處理以探討投喂紅肉河藍(lán)蛤（Potamocorbula rubromuscula Zhang et Cai）對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)、免疫指標(biāo)和抗病力的影響。
　　結(jié)果顯示，混合投喂和勻漿投喂的對(duì)蝦生長(zhǎng)速率顯著高于投喂人工配合飼料（P<0.05），但單獨(dú)投喂藍(lán)蛤的對(duì)蝦生長(zhǎng)速率較低（P＞0.05），各處理間對(duì)蝦存活率差

6、異不顯著（P＞0.05）。30天時(shí)，投喂藍(lán)蛤和勻漿飼料可顯著提高對(duì)蝦的SOD和抗菌活力（P<0.05），混合投喂可顯著提高對(duì)蝦POD、PO和抗菌活力（P<0.05）；60天后，投喂藍(lán)蛤可顯著提高對(duì)蝦血清POD和PO活力（P<0.05），混合投喂可顯著提高對(duì)蝦血清的POD和SOD活力（P<0.05），投喂勻漿飼料的對(duì)蝦各項(xiàng)免疫指標(biāo)和飼料組無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。采用Taqman熒光定量PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，投喂的藍(lán)蛤攜帶5.32×102

7、copy/mg tissue WSSV，實(shí)驗(yàn)期間，對(duì)蝦亦攜帶102～103數(shù)量級(jí)WSSV，60天后飼料組對(duì)蝦攜帶WSSV量顯著高于其它處理組（P<0.05）。攻毒實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，藍(lán)蛤組半致死時(shí)間LT50比飼料組延長(zhǎng)24％，且藍(lán)蛤組免疫保護(hù)率顯著高于混合組和勻漿組（P<0.05）；當(dāng)對(duì)蝦開(kāi)始出現(xiàn)死亡時(shí)，對(duì)蝦攜帶WSSV病毒量超過(guò)106copy/mg tissue，藍(lán)蛤組對(duì)蝦可以耐受WSSV病毒量最高，達(dá)到8.5×108copy/mg tis

8、sue。
　　研究結(jié)果表明，鮮活藍(lán)蛤和人工配合飼料的搭配使用以及藍(lán)蛤軟體部組織制成的勻漿飼料均能促進(jìn)凡納濱對(duì)蝦的生長(zhǎng)，但勻漿飼料應(yīng)妥善保存；投喂藍(lán)蛤能夠一定程度上提高對(duì)蝦非特異性免疫水平，降低潛伏感染對(duì)蝦WSSV增值速率，增強(qiáng)急性感染對(duì)蝦抵抗WSSV的能力。
　　3、飼料中添加芽孢桿菌對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)、免疫指標(biāo)和抗病力的影響
　　本實(shí)驗(yàn)研究了在配合飼料中添加108CFU/g芽孢桿菌 Z5株對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)、免疫指標(biāo)和抗

9、病力的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：芽孢桿菌組對(duì)蝦生長(zhǎng)速度較快，成活率顯著提高，比對(duì)照組提高了24%的產(chǎn)量。飼喂21d后，芽孢桿菌組對(duì)蝦血清PO活力顯著升高；42d后，芽孢桿菌組對(duì)蝦血清PO、POD和SOD活力均顯著升高。攻毒結(jié)果表明，芽孢桿菌組對(duì)蝦半數(shù)致死時(shí)間比對(duì)照組延長(zhǎng)了35%。表明飼料添加芽孢桿菌能夠提高對(duì)蝦成活率，增強(qiáng)機(jī)體免疫功能，提高對(duì)蝦抗病能力。
　　4、紅肉河藍(lán)蛤與芽孢桿菌的協(xié)同作用對(duì)凡納濱對(duì)蝦抗病力的影響
　　本實(shí)驗(yàn)主

10、要采用15N人工標(biāo)記的方法研究了紅肉河藍(lán)蛤?yàn)V食芽孢桿菌的同化及累積效果；養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)設(shè)置5個(gè)處理組，各設(shè)6個(gè)平行。飼料組：只投喂配合飼料；藍(lán)蛤組：只投喂藍(lán)蛤；藍(lán)蛤+水菌組：投喂藍(lán)蛤，水體中加入106CFU/ml芽孢桿菌，每2天換水1次，換水量為1/2，每次換水補(bǔ)充新的芽孢桿菌；藍(lán)蛤+活菌組：投喂濾食芽孢桿菌的藍(lán)蛤；藍(lán)蛤+破碎菌組：投喂濾食破碎芽孢桿菌的藍(lán)蛤。探討了協(xié)同作用對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)、免疫指標(biāo)和抗病力的影響。
　　結(jié)果顯示，藍(lán)蛤能

11、夠利用芽孢桿菌，同化率為29.88%；另有部分細(xì)菌只是過(guò)路菌，藍(lán)蛤能夠攜帶芽孢桿菌率為18.15%。對(duì)蝦攝食藍(lán)蛤5天后，組織內(nèi)對(duì)藍(lán)蛤的同化率達(dá)到46.72%，腸道對(duì)芽孢桿菌的同化和定植率為0.24%。表明藍(lán)蛤能夠利用及攜帶芽孢桿菌，芽孢桿菌通過(guò)芽孢桿菌-藍(lán)蛤-對(duì)蝦食物鏈體系的遷移與利用作用，最終可能在對(duì)蝦腸道內(nèi)定植。
　　飼料組對(duì)蝦成活率顯著低于其它4組實(shí)驗(yàn)組（P<0.05）。藍(lán)蛤組+水菌組以及藍(lán)蛤+活菌組的對(duì)蝦血清過(guò)氧化物酶活力