大豆子葉節(jié)對(duì)氯化鋰的敏感性研究及大豆GmDof11基因的遺傳轉(zhuǎn)化.pdf

1、在植物的許多生長(zhǎng)發(fā)育階段，Dof轉(zhuǎn)錄因子都扮演了重要的角色。植物的基因組中包括許多編碼Dof蛋白的基因:擬南芥中報(bào)道的Dof轉(zhuǎn)錄因子家族中基因有36個(gè);水稻中報(bào)道的Dof轉(zhuǎn)錄因子家族包括30個(gè)Dof基因;大豆中報(bào)道的Dof轉(zhuǎn)錄因子家族中基因有28個(gè)。研究表明:大豆中GmDof4和GmDof11基因的過表達(dá)能夠提高轉(zhuǎn)基因擬南芥種子的總脂肪含量，同時(shí)也提高了千粒重（Wang等，2007）。
　　 CAX基因家族被證明具有可以提高植物

2、對(duì)重金屬離子抗性的潛能。研究表明:轉(zhuǎn)到擬南芥中的GmCAX1基因是植物體內(nèi)與Li離子等離子相關(guān)的逆向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，它通過調(diào)節(jié)植物體內(nèi)的離子平衡，從而調(diào)控植物的耐鹽性（羅光佐等，2005）。
　　 本實(shí)驗(yàn)將獲得的pROK2-GmCAX1-GmDof11載體通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法將GmDof11基因?qū)氪蠖怪?，一方面利用GmCAX1基因的耐鋰性，用氯化鋰作為篩選劑以替代傳統(tǒng)的抗生素，化解了抗生素作為大豆轉(zhuǎn)基因篩選劑的弊端;另一方面，選用G

3、mDof11基因作為目的基因轉(zhuǎn)入大豆中以期許提高大豆種子的總脂肪含量。此外，本研究還探討了大豆子葉節(jié)對(duì)植物耐鋰載體的敏感性，摸索了大豆遺傳轉(zhuǎn)化體系以提高轉(zhuǎn)化率，并通過該體系將GmDof11基因?qū)氪蠖怪胁⑦M(jìn)行初步鑒定。
　　 本實(shí)驗(yàn)獲得主要結(jié)果如下:
　　 1.轉(zhuǎn)基因體系的摸索:本研究以2個(gè)大豆品種為材料，研究了種子滅菌條件，萌發(fā)條件、誘導(dǎo)培養(yǎng)基、激素濃度對(duì)大豆子葉節(jié)再生的影響，以建立一個(gè)大豆子葉節(jié)高效再生體系用于大豆的

4、遺傳轉(zhuǎn)化。結(jié)果表明，大豆種子滅菌以5～7h為宜;大豆種子萌發(fā)天數(shù)對(duì)叢生芽分化有影響，以萌發(fā)5d為宜;萌發(fā)培養(yǎng)基加入普通瓊脂，并將大豆種臍朝同一方向擺放為宜;大豆子葉節(jié)叢生芽誘導(dǎo)時(shí)BAP的濃度為2 mg/L、叢生芽生根時(shí)IBA濃度以1.5 mg/L為宜。
　　 2.子葉節(jié)對(duì)氯化鋰敏感性的研究結(jié)果:88-1和猴子毛這兩個(gè)大豆品種褐化的臨界濃度分別為1.0mM和1.4mM;氯化鋰不同濃度之間、基因型之間差異顯著，即試驗(yàn)中注意不同基因型