空腸彎曲桿菌的分離鑒定及其生物膜形成的研究.pdf

1、空腸彎曲桿菌對(duì)食品安全和人類以及動(dòng)物健康形成了很大的威脅，感染此菌可引發(fā)的細(xì)菌性腸炎、動(dòng)物腹瀉和流產(chǎn)，或誘發(fā)人類神經(jīng)系統(tǒng)疾病等。事實(shí)證明空腸彎曲桿菌在傳播過程中由于受到生存環(huán)境的壓力，多以生物膜形式存在，但是國(guó)內(nèi)尚無關(guān)于空腸彎曲桿菌生物膜建立及其生物膜耐藥性方面的研究。為證實(shí)空腸彎曲桿菌生物膜的存在，并探討實(shí)驗(yàn)室條件下體外構(gòu)建空腸彎曲桿菌生物膜的最佳方法，以及對(duì)比浮游型細(xì)菌與生物膜菌的耐藥情況，本實(shí)驗(yàn)首先根據(jù)國(guó)標(biāo)GB/T4789.28-

2、2003、SN0175-92對(duì)由豬盲腸內(nèi)容物分離出的可疑菌進(jìn)行常規(guī)生化檢測(cè)，初步鑒定的陽(yáng)性菌樣進(jìn)一步進(jìn)行PCR定性檢測(cè)；然后采用試管法對(duì)分離菌和標(biāo)準(zhǔn)菌在不同環(huán)境因素下進(jìn)行生物膜形成能力的檢測(cè)，探究不同氣體成份、溫度、pH和培養(yǎng)基對(duì)空腸彎曲桿菌生物膜形成的影響；其次，以不銹鋼針、蓋玻片、醫(yī)用輸液管為載體，構(gòu)建空腸彎曲桿菌的體外模型，通過光學(xué)顯微鏡和掃描電鏡(SEM)觀察在三種載體上生物膜形態(tài)；最后，以標(biāo)準(zhǔn)菌為質(zhì)控菌，采用美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)

3、協(xié)會(huì)(CLSI)推薦的肉湯稀釋法檢測(cè)分離菌對(duì)8種抗生素的耐藥性，同時(shí)根據(jù)ASTM E2799-2011通過卡爾加里生物膜發(fā)生裝置(MBEC)對(duì)分離得到的空腸彎曲桿菌生物膜進(jìn)行藥物敏感性研究。結(jié)果表明：
　　 1、12份豬盲腸內(nèi)容物直接劃板，通過常規(guī)生化檢測(cè)，其中6份為陽(yáng)性，其中2份經(jīng)PCR定性檢測(cè)可確認(rèn)為空腸彎曲桿菌，此菌在改良Camp-BAP培養(yǎng)基上生長(zhǎng)出典型空腸彎曲桿菌菌落，這說明結(jié)合焦性沒食子酸和無水碳酸鈉分別取2.5g/

4、L所制造的生長(zhǎng)環(huán)境完全符合空腸彎曲桿菌的生長(zhǎng)需要，而PCR檢測(cè)在檢測(cè)準(zhǔn)確性上要優(yōu)于常規(guī)生化檢測(cè)。
　　 2、空腸彎曲桿菌在正?？諝鈼l件、37℃、pH為7、培養(yǎng)基為MHB時(shí)可以更快更好的形成生物膜結(jié)構(gòu)，說明高溫、微需氧以及高營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基并不適合構(gòu)建空腸彎曲桿菌的生物膜模型。
　　 3、在相同培養(yǎng)條件及時(shí)間的前提下，掃描電鏡觀察結(jié)果顯示，在不銹鋼針以及醫(yī)用輸液管上生物膜處于黏附期以及生長(zhǎng)期，而在蓋玻片上可以觀察到成熟期的層疊狀

5、生物膜結(jié)構(gòu)，這說明分離菌在三種載體上皆可以形成生物膜，但蓋玻片是相對(duì)更適合的載體。
　　 4、2株分離菌對(duì)頭孢哌酮為100％耐藥，對(duì)喹諾酮類抗生素敏感，對(duì)阿奇霉素為高度敏感?？漳c彎曲桿菌生物膜的抑菌濃度是浮游狀態(tài)下該菌MIC值的幾百倍至上千倍，但是卻不能完全殺死生物膜內(nèi)細(xì)菌，這說明臨床使用的抗生素濃度很難治愈由空腸彎曲桿菌形成生物膜引發(fā)的疾病以及持續(xù)性感染。
　　 本研究在成功構(gòu)建其生物膜模型的基礎(chǔ)上，探討不同環(huán)境因素對(duì)