輪葉黨參再生體系的完善及其無(wú)性變異系的誘變.pdf

1、以輪葉黨參為材料，分別采用不同的培養(yǎng)基、外植體與激素組合及不同的繼代間隔時(shí)間，篩選出較為完善的再生體系。在此基礎(chǔ)上對(duì)離體葉片和愈傷組織進(jìn)行EMS誘變，選擇最佳誘導(dǎo)方法和EMS用量組合，篩選出變異植株。獲得如下結(jié)果。
　　 1.建立完善的再生體系。以MS為基本培養(yǎng)基所得的最高愈傷誘導(dǎo)率為100％，平均誘導(dǎo)率為70％，顯著高于以N6為基本培養(yǎng)基的結(jié)果。以種子、莖段和葉片為外植體均可誘導(dǎo)出愈傷組織，其中葉片誘導(dǎo)愈傷組織質(zhì)地緊密，生長(zhǎng)快

2、，不易褐化；而且有最高誘導(dǎo)率為100％。激素濃度對(duì)褐化率有一定影響，高濃度的6-BA和KT均能誘發(fā)高的愈傷褐化率，在輪葉黨參愈傷組織誘導(dǎo)階段宜選用MS作基本培養(yǎng)基附加2，4-D0.5mg.L-1、6-BA0.5mg.L-1和KT1.0mg.L-1，在此培養(yǎng)基上葉片的褐化率最低，為3.3％，而愈傷誘導(dǎo)率為86.7％，僅低于最高誘導(dǎo)率。
　　 2.繼代間隔與愈傷組織褐化率。當(dāng)繼代間隔僅為3d時(shí)，愈傷褐化率最低，為3.3％。葉片誘導(dǎo)的

3、健康愈傷組織呈淡黃綠色，質(zhì)地緊密。當(dāng)繼代間隔超過(guò)15d時(shí)，部分愈傷組織呈黃褐色或褐色，并生長(zhǎng)緩慢。當(dāng)繼代間隔超過(guò)30d，超過(guò)一半的愈傷褐化?？梢?jiàn)縮短繼代間隔是降低褐化率的有效措施。
　　 3.EMS處理與材料成活。無(wú)論經(jīng)EMS處理的葉片還是愈傷組織，其存活率和再生率均低于對(duì)照，并且隨EMS濃度的升高和處理時(shí)間的延長(zhǎng)而下降。0.4％+4h和0.3％+4h的EMS處理組合分別是葉片和愈傷組織的致死劑量。0.3％+2h和0.2％+2h

4、的EMS處理組合分別為EMS誘變離體葉片和愈傷組織的半致死濃度，前者的成活率為46.7％，分化率為14.3％；后者的成活率為50％，分化率為13.3％。
　　 4.根的誘導(dǎo)。再生苗接種到生根培養(yǎng)基15d后，芽基部開(kāi)始生根，45d后生根趨于穩(wěn)定。相對(duì)于對(duì)照，EMS處理后顯著降低叢生芽的生根率。在EMS處理離體葉片和愈傷組織的半致死濃度下，生根率分別為9.8％和12.3％，明顯低于對(duì)照的生根率(分別為78.3％和79.2％)。在EM

5、S處理的輪葉黨參離體葉片和愈傷組織的半致死濃度中均成功生根，即0.3％+2h和0.2％+2h的EMS處理組合可以作為誘變的最佳濃度。0.2％EMS處理輪葉黨參愈傷組織2h是EMS誘變輪葉黨參的最佳處理方式。
　　 5.變異體的獲得。經(jīng)對(duì)有外部形狀差異的10株誘變苗進(jìn)行皂苷測(cè)定，其中2株皂苷含量相對(duì)較高，其中6號(hào)植株皂苷含量為5.061mg/g，相對(duì)于對(duì)照組皂苷含量平均值提高了5.39％；3號(hào)植株皂苷含量為4.926mg/g，相對(duì)

6、于對(duì)照組皂苷含量平均值提高了2.58％。處理組中皂苷含量變化幅度為0.372mg/g。
　　 6.誘變?cè)偕后w的遺傳分析。對(duì)愈傷誘變?cè)偕M培苗進(jìn)行RAPD分析和聚類(lèi)分析。其中8個(gè)特異引物對(duì)10個(gè)供試材料共擴(kuò)增出59條帶，具有多態(tài)性的譜帶數(shù)為44條，占74.6％。不同組培苗之間的相似系數(shù)變化在0.454-0.774之間。組培苗6號(hào)與其他9株的相似系數(shù)為0.5，達(dá)到了相當(dāng)于品種間的遺傳差異。6號(hào)株較高皂苷含量和較大遺傳差異的結(jié)果表明