利用誘導(dǎo)子處理與啟動子轉(zhuǎn)化雙向策略提高丹參毛狀根中丹參酮含量的研究與探索.pdf

1、丹參(Salvia miltiorrhiza Bunge)，作為傳統(tǒng)中藥在治療心腦血管等疾病中已得到廣泛的應(yīng)用與開發(fā)；另外，作為新一代中草藥中的模式植物，丹參基因組測序包括基因功能等研究也正如火如荼地展開。野生丹參資源的日益匱乏，品質(zhì)的逐步退化，加上市場對丹參原材料的需求不斷提高，如何利用科學(xué)技術(shù)手段解決此類問題成了目前研究的重中之重。
　　 本實驗具體做了兩部分的工作：
　　 其一，選取丹參酮含量最高的丹參轉(zhuǎn)基因毛狀根

2、株系G50(3.55 mg/g)為材料，利用甲基茉莉酸(MJ)、水楊酸(SA)作為誘導(dǎo)子對其進(jìn)行誘導(dǎo)處理，結(jié)果表明丹參轉(zhuǎn)基因毛狀根G50在經(jīng)過MJ誘導(dǎo)處理36h后效果最為明顯，丹參酮含量提高了3.19倍(11.33 mg/g)。
　　 其二，選取擬南芥AT5G46900、AT1G22440基因啟動子作為前期研究對象，將啟動子序列構(gòu)建于植物表達(dá)載體pCAMBIA1301上，進(jìn)而分別轉(zhuǎn)化擬南芥(農(nóng)桿菌GV3101介導(dǎo))與丹參毛狀根(

3、發(fā)根農(nóng)桿菌C58C1介導(dǎo))，基因芯片數(shù)據(jù)預(yù)測這2個基因都在擬南芥根部特異表達(dá)，半定量實驗結(jié)果符合芯片預(yù)測，另外，根據(jù)GUS染色結(jié)果，GUS蛋白在擬南芥與丹參毛狀根中都有表達(dá)。
　　 本研究首次在丹參轉(zhuǎn)基因毛狀根株系中添加誘導(dǎo)子處理，并發(fā)現(xiàn)甲基茉莉酸的誘導(dǎo)效果最為顯著，在提高丹參毛狀根中丹參酮含量的研究上又向前推進(jìn)了一步；另外，成功地克隆了擬南芥AT5G46900、AT1G22440基因的啟動子，并在擬南芥與丹參毛狀根中都能啟動表