山東省部分地區(qū)豬瘟流行病學(xué)調(diào)查及其E2基因的畢赤酵母表達.pdf

1、豬瘟是由豬瘟病毒(CSFV)引起的豬的一種熱性、全身性出血、敗血性傳染病，以很強的傳染性和高致死率為特征，不同年齡、性別和品種的豬均能感染，給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失。近年來豬瘟免疫失敗的報道較多，豬瘟流行出現(xiàn)了一些新特點，這可能與高免疫壓力下豬瘟病毒變異存在一定的相關(guān)性，因此，開展豬瘟流行病學(xué)調(diào)查，掌握豬瘟的流行狀況及病毒的變異程度，以及研發(fā)亞單位疫苗作為根除豬瘟的技術(shù)儲備，對豬瘟的防控具有極其重要的意義。
　　 本研究首先

2、利用IDEXX公司的豬瘟抗體、抗原檢測試劑盒對2011年來自山東省不同地區(qū)的10個規(guī)?；庖哓i場的豬群做了抗體水平、抗原感染檢測，其中對此10個豬場共1028份血清進行了抗體水平檢測，另對這10個豬場中免疫狀況較差的5個豬場重新采取的383份血清進行了抗原檢測，結(jié)果抗體陽性率為45.34％-84.00％不等，抗原陽性率為0％-2.32％不等，說明所監(jiān)測的山東部分地區(qū)豬瘟免疫水平參差不齊，部分豬場免疫效果較差，達不到良好的保護率，同時發(fā)現(xiàn)

3、免疫豬群存在豬瘟帶毒現(xiàn)象。
　　 針對豬瘟帶毒、免疫失敗現(xiàn)象，我們又對上述所檢測豬場中送檢來的13份病料進行了RT-PCR檢測，共鑒定出6份豬瘟陽性病料，將之接種于PK-15細胞，成功分離到6株豬瘟病毒，分別命名為HZ、LW、YT、JN、RZ、TA，對這六株豬瘟毒株進行實時熒光定量檢測，結(jié)果表明它們均是流行野毒株，從而進一步證實了免疫豬場的確存在豬瘟帶毒現(xiàn)象，因此在實際生產(chǎn)中，應(yīng)對豬群的豬瘟抗體水平進行定期監(jiān)測，并適時采取措施，

4、使之保持在較好的水平之上，以抵抗野毒的感染。
　　 利用分子生物學(xué)技術(shù)，我們對已分離的6株豬瘟毒株進行E2基因部分編碼序列的擴增、克隆并測序，利用DNAstar軟件對測序結(jié)果和推斷的蛋白序列與Shimen株、HCLV株，Alfort株等9株經(jīng)典豬瘟毒株連行比對，結(jié)果發(fā)現(xiàn)分離毒株E2基因之間的無論核苷酸同源性還是蛋白質(zhì)同源性都很高;而與經(jīng)典毒株比較，核苷酸同源性在79.4％-94.8％不等，蛋白質(zhì)同源性在82.6％-96.1％不等

5、，其中與GuangXi株的同源性最高;與HCLV株的核苷酸序列、蛋白質(zhì)序列同源性分別只為79.4％-82.3％和83.2％-88.0％，與Shimen株的核苷酸序列、蛋白序列同源性只為81.3％-84.3％和84.4％-89.2％，這意味著山東省最近一年流行的豬瘟毒株與廣西株有一定的親緣關(guān)系，而與我國的疫苗株和Shimen株相比，則發(fā)生了較大的變異，說明我國豬瘟流行毒株正朝著遠離疫苗毒株的方向變化;根據(jù)遺傳進化樹分析，此6株山東省流行豬

6、瘟毒株均屬于基因Ⅱ群，與GuangXi株同屬于一個基因群，且都屬于2.2亞基因群，而Shimen株、HCLV株屬于基因Ⅰ群。
　　 鑒于山東省最近一年的流行毒株已向遠離疫苗株的方向變化，這種變化是否是豬瘟免疫失敗的原因之一尚難確定，但是開展豬瘟根除和豬瘟凈化技術(shù)儲備的研究，尤其是開展豬瘟基因工程疫苗的研究，意義還是非常重大的。我們對豬瘟病毒最主要的保護性抗原E2基因進行了去除跨膜區(qū)域的PCR擴增，將其插入巴斯德畢赤酵母表達載體p