維生素E對(duì)蛋雞維生素A關(guān)鍵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白和分解酶的影響.pdf

1、本論文包括體內(nèi)和體外兩個(gè)試驗(yàn)。探討了維生素E對(duì)維生素A的影響及其作用機(jī)制。
　　 試驗(yàn)一維生素E對(duì)蛋雞體內(nèi)維生素A關(guān)鍵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白和分解酶的影響
　　 選取體重和產(chǎn)蛋率相近的24周齡京紅產(chǎn)蛋雞450只,隨機(jī)分為5個(gè)處理組,每處理設(shè)6個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù)15只雞,分別采食基礎(chǔ)日糧和4種試驗(yàn)日糧。基礎(chǔ)日糧不添加VE,4種試驗(yàn)日糧分別添加20、80、320和1280 IU／kg VE。預(yù)飼期4周,試驗(yàn)期8周。結(jié)果表明:在試驗(yàn)第4和第8

2、周,隨著日糧VE添加量的增加,肝臟中VA的含量顯著增加(P＜0.05)且呈現(xiàn)劑量效應(yīng)。日糧中高劑量的VE(320 IU／kg和1280 IU／kg)可顯著降低肝臟RBP的含量(P＜0.05)。蛋雞肝臟微粒體蛋白和CYP450含量不受日糧VE添加量的影響(P＞0.05)。
　　 試驗(yàn)二蛋雞肝細(xì)胞分離及制備方法的優(yōu)化
　　 本試驗(yàn)通過(guò)兩種肝細(xì)胞分離及制備方法的對(duì)比,旨在對(duì)蛋雞肝臟細(xì)胞分離和制備方法進(jìn)行優(yōu)化。以結(jié)扎腸系膜后靜脈

3、遠(yuǎn)心端,不結(jié)扎輸卵管靜脈和胰十二指腸靜脈的成年雞肝細(xì)胞培養(yǎng)灌流法為對(duì)照組；以本試驗(yàn)建立的同時(shí)結(jié)扎腸系膜后靜脈遠(yuǎn)心端、輸卵管靜脈和胰十二指腸靜脈的灌流方法為處理組,進(jìn)行蛋雞肝細(xì)胞培養(yǎng),分別記錄肝臟灌流的成功率、肝細(xì)胞數(shù)量和細(xì)胞活率。同時(shí),分別于試驗(yàn)第4 h、24 h、48 h、144 h和168 h觀察細(xì)胞形態(tài)、測(cè)定肝細(xì)胞培養(yǎng)基上清液中乳酸脫氫酶(LDH)活力。結(jié)果表明,優(yōu)化后的方法可使蛋雞肝臟灌流的成功率提高至100％,肝細(xì)胞數(shù)量顯著增

4、加至(1.09±0.21)×109個(gè)(P＜0.05),細(xì)胞活率也顯著提升至(95.3±1.3)％(P＜0.05)。兩種方法培養(yǎng)的肝細(xì)胞形態(tài)和培養(yǎng)基上清液LDH活力無(wú)顯著差異(P＞0.05)。結(jié)果表明,本試驗(yàn)建立的肝細(xì)胞分離和制備方法比原有方法,更適用于產(chǎn)蛋家禽肝細(xì)胞的分離和制備,通過(guò)此法可獲得量多、質(zhì)優(yōu)的肝細(xì)胞,滿(mǎn)足相關(guān)試驗(yàn)研究需要。
　　 試驗(yàn)三α-生育酚對(duì)蛋雞肝細(xì)胞視黃醇結(jié)合蛋白和細(xì)胞色素P450酶系主要亞型的影響
　

5、　 本試驗(yàn)以蛋雞肝細(xì)胞為試驗(yàn)對(duì)象,按照細(xì)胞培養(yǎng)液中添加的α-生育酚濃度(0、10、50和100μ M)不同分為4個(gè)處理。將用于肝細(xì)胞原代培養(yǎng)的1只產(chǎn)蛋雞設(shè)為1個(gè)重復(fù),每個(gè)處理設(shè)4個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù)設(shè)6個(gè)培養(yǎng)孔。α-生育酚處理20 min后收集細(xì)胞培養(yǎng)液和細(xì)胞懸液,測(cè)定其LDH、總蛋白和RBP含量；并用半定量PCR法測(cè)定肝細(xì)胞RBP、CYP26A1的mRNA水平。結(jié)果表明:α-生育酚100μ M可顯著降低肝細(xì)胞RBP的含量及其mRNA的表