華東地區(qū)Q型煙粉虱抗性監(jiān)測(cè)及抗性基在頻率檢測(cè).pdf

1、煙粉虱Bemisia tabaci(Gennadius)是熱帶和亞熱帶地區(qū)危害最嚴(yán)重的害蟲之一,可通過直接刺吸寄主植物汁液以及傳播上百種植物病毒造成危害。煙粉虱是一個(gè)由多種生物型組成的復(fù)合種,不同生物型在寄主范圍、地理分布、抗藥性和傳毒能力等方面存在顯著差異,其中B型和Q型是目前研究最為廣泛深入的兩種生物型。長(zhǎng)期以來,化學(xué)防治是控制煙粉虱的主要手段,然而,大量化學(xué)藥劑的使用已導(dǎo)致煙粉虱對(duì)包括有機(jī)磷類、氨基甲酸酯類、新煙堿類和昆蟲生長(zhǎng)調(diào)節(jié)

2、劑在內(nèi)的多種殺蟲劑產(chǎn)生抗藥性。本文對(duì)華東地區(qū)Q型煙粉虱田間種群進(jìn)行了抗性監(jiān)測(cè)、殺蟲劑靶標(biāo)基因克隆和序列分析以及抗性等位基因頻率檢測(cè)。此外,還檢測(cè)了Q型煙粉虱田間種群與新煙堿類殺蟲劑抗性相關(guān)的細(xì)胞色素P450基因CYP6CM1內(nèi)含子單核苷酸多態(tài)性,并克隆和分析了CYP6CM1基因5'側(cè)翼序列。
　　 應(yīng)用成蟲浸葉生測(cè)法研究了江蘇無錫、揚(yáng)州、東臺(tái)和浙江杭州以及上海5個(gè)地區(qū)Q型煙粉虱田間種群對(duì)6種代表性殺蟲劑的抗性水平。結(jié)果表明,與相

3、對(duì)敏感種群相比,Q型煙粉虱田間種群已對(duì)氯氰菊酯、吡蟲啉和烯啶蟲胺產(chǎn)生了低到中等水平抗性,LC50分別達(dá)到570.41-2413.93 mg/L、44.48-653.51 mg/L和8.65-103.17 mg/L,對(duì)敵敵畏和丁硫克百威也較不敏感,LC50分別高達(dá)460.86-1066.99 mg/L和50.18-349.12 mg/L。對(duì)阿維菌素表現(xiàn)為極敏感,LC50僅為0.0006-0.02 mg/L。
　　 通過RCR擴(kuò)增獲

4、得了華東地區(qū)Q型煙粉虱田間種群長(zhǎng)度分別為287 bp和184bp的乙酰膽堿酯酶acel基因和鈉離子通道基因片斷。序列分析表明,華東地區(qū)Q型煙粉虱田間種群存在與有機(jī)磷抗性相關(guān)的乙酰膽堿酯酶F331W突變和與擬除蟲菊酯抗性相關(guān)的鈉離子通道L925I和T929V突變。
　　 通過PCR-RFLP技術(shù)檢測(cè)了華東地區(qū)不同年份和種群Q型煙粉虱田間種群與有機(jī)磷抗性相關(guān)的乙酰膽堿酯酶aoel基因F331W突變,發(fā)現(xiàn)F331W突變存在于所檢測(cè)的所

5、有煙粉虱種群個(gè)體中;利用PCR-RFLP和PASA技術(shù)分別檢測(cè)了與擬除蟲菊酯抗性相關(guān)的鈉離子通道IIS4-5結(jié)構(gòu)域L925I和T929V突變,發(fā)現(xiàn)L925I和T929V突變頻率分別為0.394-0.633和0.559-0.904,并且T929V平均突變頻率(0.721)明顯高于L925I平均突變頻率(0.589),但L925I和T929V突變頻率與Q型煙粉虱對(duì)氯氰菊酯的抗性水平?jīng)]有相關(guān)性,表明存在其它代謝抗性機(jī)制。
　　 通過P

6、CR擴(kuò)增獲得Q型煙粉虱揚(yáng)州種群細(xì)胞色素P450基因CYP6CM1片段序列,包括63 bp的外顯子片段和826-829 bp的內(nèi)含子片段。多重序列比對(duì)發(fā)現(xiàn),在內(nèi)含子第195、230和242等3個(gè)堿基處存在與新煙堿類殺蟲劑抗性相關(guān)的單核苷酸多態(tài)性(SNPs)。進(jìn)一步通過利用基因組步移技術(shù)獲得了長(zhǎng)度為1226 bp的CYP6CM1基因5'側(cè)翼序列,利用NNPP在線分析軟件預(yù)測(cè)轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)為位于起始密碼子上游57 bp處的堿基A,通過TFSEA