觀賞鳳梨高頻再生以及遺傳轉(zhuǎn)化研究.pdf

1、觀賞鳳梨是一種鳳梨科的集觀花、觀葉于一體的花卉植物,具有很高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。但是我國自有的優(yōu)良品種少,現(xiàn)市場上的優(yōu)良品種多為國外引進(jìn),此外種子的萌發(fā)力弱,傳統(tǒng)的分芽繁殖系數(shù)低,育種周期長,為此,建立優(yōu)良品種的再生體系來保種和繁殖種苗變得十分迫切,基因工程技術(shù)培育轉(zhuǎn)基因優(yōu)良品種勢在必行.本文以觀賞鳳梨鶯歌屬‘名寶劍’('Vriesea Tiffany')為材料,研究了不同激素對觀賞鳳梨胚性愈傷組織及胚性愈傷組織再生的影響;胚性愈傷組織和非胚性

2、愈傷組織顯微結(jié)構(gòu)差異及胚性愈傷組織分化過程中的結(jié)構(gòu)差異;農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化鳳梨愈傷組織的影響因素等。并對觀賞鳳梨轉(zhuǎn)OsCYP2進(jìn)行初步研究。所取得的主要研究結(jié)果如下:
　　 1、建立了觀賞鳳梨胚性愈傷組織誘導(dǎo)及高頻植株再生的體系.結(jié)果表明:NAA對愈傷組織誘導(dǎo)的影響達(dá)到極顯著水平(p=0.0019),其中0.5 mg/L NAA最有利于提高愈傷組織的誘導(dǎo)率和胚性愈傷組織的比例,最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+2.0 mg/L6-BA+0.5

3、mg/L NAA+2.0 mg/L2,4-D,誘導(dǎo)率高達(dá)80％;6-BA和NAA組合有利于加快胚性愈傷組織的分化和提高不定芽分化頻率,胚性愈傷組織在MS+0.5 mg/L6-BA+0.1 mg/L NAA培養(yǎng)基上分化效率達(dá)到100％。電鏡觀察發(fā)現(xiàn):胚性愈傷組織結(jié)構(gòu)緊密,細(xì)胞較小,細(xì)胞內(nèi)含物豐富,細(xì)胞代謝旺盛;非胚性愈傷組織結(jié)構(gòu)疏松,細(xì)胞體積巨大,內(nèi)含大液泡,基本無內(nèi)含物;胚性愈傷組織在分化過程中細(xì)胞形態(tài)存在很大差異。
　　 2、

4、建立了農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)基因體系。通過EHA105農(nóng)桿菌介導(dǎo)將Pbin438-GFP轉(zhuǎn)入觀賞鳳梨胚性愈傷組織細(xì)胞中,通過共聚焦顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn),GFP在愈傷組織細(xì)胞中成功表達(dá)。獲得最佳觀賞鳳梨轉(zhuǎn)化體系,為今后觀賞鳳梨基因工程育種奠定基礎(chǔ)。
　　 3、獲得了農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)OsCYP2陽性植株。胚性愈傷組織經(jīng)農(nóng)桿菌侵染后進(jìn)行抗性篩選及PCR驗(yàn)證獲得轉(zhuǎn)基因植株。OsCYP2對植物有一定的抗逆境作用,本研究有望獲得抗鹽堿性較強(qiáng)的新型轉(zhuǎn)基因觀賞鳳梨