黃鱔（Monopterus albus）粘膜免疫系統(tǒng)的研究.pdf

1、魚類是低等的脊椎動(dòng)物,以血清免疫球蛋白為中心的系統(tǒng)免疫(systemicimmunity)尚不完善,但是以粘膜免疫系統(tǒng)為基礎(chǔ)的粘液性免疫卻很發(fā)達(dá).由腸道、皮膚和鰓及其表面的粘液組成的粘膜免疫系統(tǒng)是抵御病原入侵的第一道屏障,在魚類免疫中起重要作用,已成為魚類免疫學(xué)研究的一個(gè)熱點(diǎn)領(lǐng)域,引起人們的廣泛關(guān)注. 本文以我國(guó)主要名優(yōu)淡水魚類黃鱔作為實(shí)驗(yàn)材料,對(duì)其消化道、皮膚等粘膜相關(guān)淋巴組織的構(gòu)成、粘液中的免疫球蛋白及Ig陽(yáng)性細(xì)胞在粘膜相關(guān)

2、淋巴組織當(dāng)中的分布進(jìn)行研究,以期為進(jìn)一步研究黃鱔的粘膜免疫機(jī)制奠定基礎(chǔ). 利用組織化學(xué)技術(shù)對(duì)黃鱔皮膚、咽、食道、胃及前中后腸粘膜組織的顯微結(jié)構(gòu)、主要免疫相關(guān)細(xì)胞的分布進(jìn)行研究.結(jié)果表明咽、食道、胃部存在少量的淋巴細(xì)胞;皮膚和腸道中分布著豐富的淋巴細(xì)胞,其中背部皮膚的淋巴細(xì)胞遠(yuǎn)遠(yuǎn)多于腹部;腸道中的IELs比LPLs多,而前中后腸的淋巴細(xì)胞數(shù)量沒有明顯區(qū)別.由于前腸時(shí)常有寄生蟲的感染,其嗜曙紅粒細(xì)胞在固有層有大量分布,數(shù)量比中后腸多

3、. 對(duì)粘膜相關(guān)淋巴組織的組織切片進(jìn)行阿新藍(lán)一過碘酸雪夫氏試劑(A-PAS)染色,觀察黃鱔粘膜相關(guān)組織粘液細(xì)胞的形態(tài)和類型.結(jié)果表明,黃鱔皮膚和消化道中存在豐富的粘液細(xì)胞,可分成三型:Ⅰ型為藍(lán)色,AB陽(yáng)性,PAS陰性,含酸性粘多糖;Ⅱ型為紫紅色,AB與PAS均為陽(yáng)性,同時(shí)含有中性粘多糖和酸性粘多糖,但以中性粘多糖為主;Ⅲ型為藍(lán)紫色,AB與PAS均為陽(yáng)性,同時(shí)含中性粘多糖和酸性粘多糖,但以酸性粘多糖為主.黃鱔皮膚中的粘液細(xì)胞均屬于Ⅰ

4、型,即含酸性粘多糖;咽部和食道同時(shí)存在ⅠⅡⅢ型粘液細(xì)胞,其中咽部的大部分為Ⅲ型粘液細(xì)胞,而食道的大部分為Ⅰ型粘液細(xì)胞,兩者的Ⅱ型粘液細(xì)胞數(shù)量均很少;腸道中的粘液細(xì)胞均為Ⅲ型. 采用Hitrap protein A HP親和層析法成功從黃鱔血清中純化得到IgM,其重鏈分子量為72kDa,,輕鏈為2條,分子量分別為28kDa和25.3kDa.從黃鱔皮膚粘液和腸粘液中得到Protein A特異性結(jié)合的蛋白,結(jié)果顯示兩者的電泳圖譜在重鏈

5、區(qū)有兩條明顯的蛋白條帶,其中一條蛋白帶與血清Ig的重鏈分子量一致;在輕鏈區(qū)也有相應(yīng)的蛋白帶,因此從腸粘液和皮膚粘液分離得到的Protein A結(jié)合蛋白中存在IgM. 用純化的黃鱔血清IgM作為抗原免疫新西蘭大白兔制備多克隆抗血清,免疫雙擴(kuò)散法測(cè)定多抗效價(jià)為1:32;同時(shí),皮膚粘液和腸粘液IgM與此多抗均有免疫沉淀反應(yīng).Western-blotting顯示該多克隆抗體與血清Ig、皮膚粘液IgM及腸粘液IgM的重鏈均能特異性結(jié)合.

6、 通過免疫組織化學(xué)原位顯示黃鱔IgM陽(yáng)性細(xì)胞在粘膜相關(guān)淋巴組織中的分布.結(jié)果表明黃鱔皮膚、胃部和整個(gè)腸道均有IgM陽(yáng)性細(xì)胞的存在.其中,皮膚的IgM陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量較少,主要分布在表皮的基底部,IgM陽(yáng)性細(xì)胞在胃底部的分布很少,主要存在于胃腺的上皮細(xì)胞間.整個(gè)腸道分布著許多IgM陽(yáng)性細(xì)胞,上皮內(nèi)IgM陽(yáng)性細(xì)胞遠(yuǎn)遠(yuǎn)多于固有層的IgM陽(yáng)性細(xì)胞.通過普通組化比較顯示上皮內(nèi)IgM陰性淋巴細(xì)胞的數(shù)量要比IgM陽(yáng)性細(xì)胞多. 本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)黃