轉(zhuǎn)TR1基因水稻及后代的耐熱性遺傳分析.pdf

1、目前培育出的耐熱性的水稻品種的農(nóng)藝性狀多數(shù)不佳，難以直接利用，因此通過植物轉(zhuǎn)基因技術將耐熱基因轉(zhuǎn)入水稻，并對轉(zhuǎn)基因水稻的耐熱性和農(nóng)藝性狀等指標進行綜合分析，這對培育出在生產(chǎn)上有應用價值的耐高溫水稻品種有重要意義。
　　 TRI基因是從甘藍型油菜中成功克隆出的一個可提高植物熱脅迫抗性的耐熱基因，經(jīng)實驗證明能夠提高油菜的耐熱受性。本研究通過對農(nóng)桿菌介導法轉(zhuǎn)入TR1基因的粳稻品種日本晴的T0代和T1代再生植株進行耐熱性遺傳分析，實驗取

2、得了以下結(jié)果：1.對日本晴T0代和T1代轉(zhuǎn)基因再生植株進行PCR驗證，其中254株T0代轉(zhuǎn)基因植株中獲得TRl+Hyg的PCR雙陽性植株155株，陽性檢出率為61.02％,67株T1代中獲得59株，陽性檢出率占88.06％。2.對11株T0代PCR陽性植株進行熒光定量實時PCR分析，結(jié)果表明TR1基因在11株轉(zhuǎn)基因植株中表達，但在轉(zhuǎn)基因植株內(nèi)的表達量存在差異，最高值為7.89,最低值為0.81，這可能和插入的拷貝數(shù)和插入的位點有關系。3

3、.對轉(zhuǎn)基因植株T1代自交種子進行潮霉素抗性發(fā)芽實驗，結(jié)果表明：抽取的31個轉(zhuǎn)基因株系中有14個株系T1代植株的自交種子潮霉素抗感分離比符合3:1，遵循孟德爾單基因顯性遺傳規(guī)律。T0代轉(zhuǎn)基因水稻葉片的潮霉素抗性結(jié)果與PCR結(jié)果一致率達85％以上。4.通過花粉活力測試、電導率檢測和葉片脯氨酸含量檢測這三個指標比較了轉(zhuǎn)基因植株與非轉(zhuǎn)基因植株在熱脅迫和熱沖擊處理下的耐受性，結(jié)果表明：熱脅迫處理后，對照的花粉平均染色率(max:70％)都低于轉(zhuǎn)基

4、因水稻(max:85.64％)；對照和轉(zhuǎn)基因水稻相對電導率都有所上升，脅迫第5天野生型相對電導率比未脅迫時增加了59.33％，轉(zhuǎn)基因僅增加了10％左右；高溫處理轉(zhuǎn)基因T0和T1代，轉(zhuǎn)基因植株脯氨酸含量均比非轉(zhuǎn)基因植株高，葉片脯氨酸含量比對照高出近30％。初步說明TR1基因能提高水稻的耐熱能力。5.對T0代和T1代水稻株高、穗長、千粒重和結(jié)實率等重要性狀進行了分析。結(jié)果顯示：與對照相比，多數(shù)T0代和T1代水稻農(nóng)藝性狀產(chǎn)生了不同程度的變異，