珍稀保護(hù)竹種筇竹遺傳多樣性分析.pdf

1、筇竹為我國(guó)特有的珍稀保護(hù)竹種,開(kāi)展筇竹種群遺傳遺傳多樣性的研究對(duì)于該物種的保護(hù)及開(kāi)發(fā)利用有重要意義。本研究首次應(yīng)用微衛(wèi)星(SSR)和AFLP兩種分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)云南綏江和四川敘永兩個(gè)筇竹種群進(jìn)行遺傳多樣性研究,為保護(hù)筇竹遺傳多樣性提供理論依據(jù)和技術(shù)支撐。主要研究結(jié)果如下:
　　 1、通過(guò)對(duì)CTAB提取液不同配方的的比較,得到了一種適合筇竹基因組DNA提取的提取液。運(yùn)用該方法進(jìn)行筇竹基因組DNA的提取能提出適合進(jìn)行分子標(biāo)記技術(shù)所需的

2、高質(zhì)量DNA。
　　 2、以提取的筇竹基因組DNA為材料,分析了Taq聚合酶、模板濃度、Mg2+濃度、dNTP濃度以及引物濃度對(duì)SSR-PCR擴(kuò)增結(jié)果的影響,建立了穩(wěn)定的、可重復(fù)的筇竹SSR-PCR最佳反應(yīng)體系及PCR擴(kuò)增參數(shù)。研究結(jié)果表明:在20μL SSR-PCR反應(yīng)體系中,模板DNA最適宜用量為60ng；Mg2+的最適濃度為1.5mmol·L-1；dNTP最適濃度為0.2mmolL·-1；單引物的最適濃度均為0.25μmm

3、ol·L-1；Taq聚合酶在20μL反應(yīng)體系中宜加入0.8U。
　　 3、用這10對(duì)引物研究筇竹遺傳結(jié)構(gòu)結(jié)果表明:筇竹種群平均基因多樣度Nei's值為0.7874,平均觀測(cè)雜合度Ho為0.7359,平均期望雜合度脅為0.7315,觀測(cè)雜合度略高。除RM245實(shí)際觀測(cè)雜合度低于期望雜合度較多外,其余各位點(diǎn)實(shí)際觀測(cè)雜合度與期望雜合度均差異不顯著。平均固定指數(shù)(F)值為-0.0060,表明筇竹群體的雜合體和純合體相差不多。Fst值從0

4、.0123(RM205)到0.0938(RM337),平均值為0.0459,即有4.59％的遺傳變異存在于種群之間,說(shuō)明遺傳變異主要存在于種群之內(nèi)(95.41％)。而估算筇竹種群的Nm值為5.2004>1,說(shuō)明大的基因流能夠阻止遺傳漂變引起的種群間的遺傳分化。
　　 4、篩選出10對(duì)具多態(tài)性和清晰度都較高的AFLP引物組合用于材料分析。共擴(kuò)增出可統(tǒng)計(jì)條帶680條,平均每對(duì)引物擴(kuò)增帶數(shù)為68條,其中多態(tài)性條帶為662條,多態(tài)性位點(diǎn)

5、的比例是97.20％。
　　 5、筇竹供試的2個(gè)種群均具有豐富的遺傳多樣性,種群內(nèi)平均遺傳多樣性Nei’s為0.3321,種群水平平均Nei,s遺傳多樣性為0.3949,Shannon信息指數(shù)為0.5754。種群分化系數(shù)(Gst)為0.1572,基因流為2.9009,表明筇竹種群內(nèi)遺傳多樣性大于種群間遺傳多樣性。遺傳一致度為0.8219,遺傳距離平均值為0.1961。根據(jù)遺傳距離進(jìn)行了UPGMA聚類分析,以遺傳距離0.57為分類