雙峰駝瘤胃細(xì)菌多樣性及宏基因組文庫(kù)構(gòu)建與初步篩選.pdf

1、瘤胃微生物在反芻動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化吸收中起著舉足輕重的作用，在飼料、瘤胃調(diào)控、食品發(fā)酵和生物質(zhì)利用等領(lǐng)域中具有極大的應(yīng)用潛力。本試驗(yàn)采用免培養(yǎng)技術(shù)分析新疆雙峰駝瘤胃細(xì)菌多樣性，明確其種群組成；構(gòu)建宏基因組文庫(kù)，并從中篩選有價(jià)值的功能基因，為今后進(jìn)一步開發(fā)利用瘤胃微生物提供科學(xué)基礎(chǔ)和技術(shù)平臺(tái)。研究取得了以下結(jié)果：
　　 研究建立了一種簡(jiǎn)便快速地從雙峰駝瘤胃微生物細(xì)胞中提取總DNA的方法，采取凍融-酶-SDS相結(jié)合的直接提取法，提取得

2、到的瘤胃微生物總DNA較完整，片段大于23 kb。
　　 構(gòu)建了雙峰駝瘤胃細(xì)菌16S rDNA克隆文庫(kù)，該文庫(kù)的覆蓋率達(dá)到57%，Shannon-Wiener index（H′）多樣性指數(shù)為4.57。采用ARDRA技術(shù)分析該文庫(kù)中的331個(gè)陽(yáng)性克隆，得到130個(gè)可操作分類單元（OTUs）。分析結(jié)果顯示在瘤胃內(nèi)存在厚壁菌門、擬桿菌門、變形菌門、疣微菌門、TM7和未分類細(xì)菌，其中厚壁菌門為優(yōu)勢(shì)菌群，占63.8%。利用T-RFLP技術(shù)

3、分析顯示在雙峰駝瘤胃內(nèi)存在變形菌門、厚壁菌門、放線菌門、擬桿菌門、柔膜菌門、綠彎菌門和浮霉菌門。研究結(jié)果說明兩種方法結(jié)合可檢測(cè)到的菌群種類更加豐富。經(jīng)分析雙峰駝瘤胃細(xì)菌與GeneBank數(shù)據(jù)庫(kù)中已知序列相似性在85%-99%之間，相似率大于97%部分只占35.4%，未知序列占64.6%，表明雙峰駝瘤胃細(xì)菌中只有少數(shù)為已知種，大多為未知的新屬、種或潛在的其他新的分類單元；其中可培養(yǎng)細(xì)菌僅占5.4%，未培養(yǎng)占94.6%。
　　 以經(jīng)