小菜蛾取食誘導的菜心mRNA表達譜及差異表達基因克隆.pdf

1、植物遭受昆蟲取食后會產生一系列生理反應。在長期的協(xié)同進化過程當中,植物逐漸形成了各種應對害蟲取食的自我防御機制。這包括組成型防御機制和誘導型防御機制兩大類。其中誘導型防御是植物防御侵害的主要機制,其研究正日益受到人們的重視,但蔬菜受到害蟲取食為害后的誘導型防御的分子反應機制報道尚少。
　　 本研究利用新一代測序技術平臺Illumina Solexa Genome Analyser分析菜心(Brassica parachinese

2、)被小菜蛾(Plutella xylostella)取食脅迫后mRNA表達譜的變化情況。分別在小菜蛾取食0.5h、4h、8h、12h四個時間點上采集對照組和處理組的葉片樣品,提取總RNA,最后分別將各組4個時間點的總RNA等量混合。通過Solexa測序,兩個RNA樣本分別得到7373393和6400927個cleantag,其中有208023和174926的distinct tag。經過生物信息學分析得到7773個差異表達tag,能在參

3、考基因數據庫中唯一比對到一個基因的有125個,其中40個上調表達,85個下調表達。這些基因編碼MYB類轉錄因子、絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶、鋅指蛋白、普遍脅迫蛋白、銅鋅超氧化物歧化酶前體、熱激蛋白、葉綠素a/b結合蛋白、光系統(tǒng)Ⅱ蛋白、S-腺苷甲硫氨酸合成酶、3-磷酸甘油醛脫氫酶、ADP-葡萄糖焦磷酸化酶、果膠甲酯酶、質膜水孔蛋白、磺基轉移酶、組蛋白H3等,另有17個基因功能未知,12個沒有有意義的比對結果。已有的研究表明,其中有許多基因在植

4、物受其它逆境脅迫時也被誘導表達?；虮倔w及代謝途徑分析發(fā)現這些基因參與植物抗逆過程中的的光合作用、能量代謝、信號轉導、基因表達調控、脅迫反應、碳和脂肪酸代謝、蛋白質代謝、生長發(fā)育、細胞結構組分、質膜與物質運輸等。通過RACE技術克隆出兩個核酸片段,BLASTnr比對分析推測它們分別為金屬硫蛋白和光合系統(tǒng)Ⅱ多肽蛋白的片段。
　　 本研究從mRNA水平上分析菜心被小菜蛾取食誘導的基因表達變化情況,明確了125個基因受小菜蛾取食誘導的