斜帶石斑魚兩種hepcidin基因的分子克隆和生物特性研究.pdf

1、中山大學(xué)碩士學(xué)位論文斜帶石斑魚兩種hepcidin基因的分子克隆和生物特性研究姓名：周京賡申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：秦啟偉20100605毒( S G I V ) 、革蘭氏陰性菌創(chuàng)傷弧菌、革蘭氏陽(yáng)性菌金黃色葡萄球菌和真菌釀酒酵母后，E C ．h c p c i d i n l 和E C ．h e p c i d i n 2 的轉(zhuǎn)錄水平均出現(xiàn)明顯的上調(diào)，而且E C - h e p c i d i n l 的轉(zhuǎn)錄

2、上調(diào)相對(duì)于E C ．h e p c i d i n 2 更明顯。此外，石斑魚在注射F e C l 2后，肝中的E C ．h e p c i d i n l 和E C ．h e p c i d i n 2 轉(zhuǎn)錄水平也發(fā)生明顯的上調(diào)，E C ．h e p c i d i n l 的轉(zhuǎn)錄上調(diào)相對(duì)于E C ．h e p c i d i n 2 也更明顯。E C ．h e p c i d i n l 和E C ．h e p c i d i n 2

3、 對(duì)于鐵離子代謝的調(diào)節(jié)作用可能有利于發(fā)揮其抑菌作用。我們通過(guò)人工合成E C ．h e p c i d i n l 和E C - h e p c i d i n 2 多肽來(lái)檢測(cè)它們的活性。人工合成的E C ．h e p c i d i n l 和E C ．h e p c i d i n 2 均能顯明抑制創(chuàng)傷弧菌和釀酒酵母的生長(zhǎng)，并且隨多肽濃度的提高其抑菌作用變強(qiáng)，而對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌作用不明顯。此外，我們發(fā)現(xiàn)E C - h e p c

4、 i d i n l 的抑菌活性要明顯強(qiáng)于E C ．h e p c i d i n 2 。本論文中發(fā)現(xiàn)含有4 個(gè)半胱氨酸的h e p c i d i n ( E C ．h e p c i d i n l 和E C ．h e p c i d i n 2 ) 具有抑菌活性，這種結(jié)構(gòu)的h e p c i d i n 鮮有報(bào)道，雖然很多8 或6 個(gè)半胱氨酸的h e p c i d i n已報(bào)道具有活性。我們構(gòu)建了h e p c i d i n

5、與綠色熒光蛋白( G F P ) 的融合表達(dá)載體，以此來(lái)研究h e p c i d i n 在石斑魚細(xì)胞中的定位。將h e p c i d i n - G F P 表達(dá)載體轉(zhuǎn)染進(jìn)石斑魚脾細(xì)胞( G S ) 后，E C ．h e p c i d i n l 和E C ．h e p c i d i n 2 均在細(xì)胞中均勻分布，但是在細(xì)胞感染病毒S G I V 的早期，E C ．h e p c i d i n l 向細(xì)胞膜聚集并形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)。

6、將病毒S G I V 分別和E C - h e p c i d i n l 和E C ．h e p c i d i n 2 合成多肽孵育后再感染體外培養(yǎng)的G S 細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)和E C ．h e p c i d i n l 作用后，病毒對(duì)細(xì)胞的感染進(jìn)程明顯變緩，提示E C - h e p c i d i n l 可能在阻止病毒入侵方面起重要作用。關(guān)鍵字：斜帶石斑魚；抗茵肽h e p c i d i n ；基因克隆；抗菌活性；新加坡石斑魚虹彩