山楂蜂花粉多糖提取、分離純化、結(jié)構(gòu)鑒定和生物活化的研究.pdf

1、近年來，花粉作為優(yōu)良的全營養(yǎng)食物被全世界廣泛關(guān)注，掀起一股“花粉研究熱”，而且國內(nèi)對花粉的基礎(chǔ)研究和應(yīng)用研究也已經(jīng)全面開展，并取得可喜成果，有些方面已進(jìn)入國際研究的前沿。山楂蜂花粉在中國北方產(chǎn)量巨大，充分利用我國山楂蜂花粉資源，對山楂蜂花粉進(jìn)行深入系統(tǒng)研究，使這一豐富資源的開發(fā)和利用提高到一個新的水平，將會產(chǎn)生極大的經(jīng)濟效益和社會效益。 本文以山楂蜂花粉為原料，采用復(fù)合破壁法即采用機械破壁、冷凍破壁和酶法破壁三種方法進(jìn)行分花粉破

2、壁，以此達(dá)到較為理想的破壁效果。同時通過試驗設(shè)計對熱水浸提、乙醇沉淀的工藝進(jìn)行了優(yōu)化，最后經(jīng)過脫蛋白、透析得到多糖粗品(CPP)。CPP通過DEAE Sepharose CL-6B凝膠柱層析進(jìn)一步純化得到CPP-1和CPP-2兩種組分。經(jīng)紅外光譜檢測證實具有多糖類物質(zhì)的特征吸收峰。然后通過Sephadex G-100凝膠柱層析檢測為單一對稱峰，并通過高效凝膠色譜測得兩者分子量分別為3．7×105Da和7．8×104Da。通過氣相色譜測得

3、CPP-1由L-鼠李糖、L-果糖、D-阿拉伯糖、D-木糖、D-甘露糖、D-半乳糖和D-葡萄糖七種單糖組成，其摩爾比為0．67：0．44：10．16：0．66：1．03：5．51：9．94； CPP-2由L-鼠李糖、D-阿拉伯糖、D-甘露糖、D-半乳糖和D-葡萄糖五種單糖組成，摩爾比為2．12：9．82：3．60：0．89：5．56。經(jīng)部分酸水解甲基化分析，結(jié)合氣質(zhì)聯(lián)用儀，推斷出CPP-1和CPP-2是由1，5-L-Araf殘基組成的還原

4、性多糖。 本研究從清除DPPH自由基、抑制羥基自由基的產(chǎn)生和還原力、清除超氧陰離子自由基4個方面研究了CPP、CPP-1和CPP-2的體外抗氧化效果，結(jié)果表明粗多糖CPP和純化組分CPP-1、CPP-2對DPPH自由基的清除作用和羥基自由基的抑制作用明顯，與Vc接近，而還原力和清除超氧陰離子自由基的能力低于Vc。免疫活性研究主要通過對巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響、T淋巴細(xì)胞增殖功能的影響和NK細(xì)胞毒活性的影響來測定，相對CPP-1而言