小麥硬脂酰基栽體蛋白脂肪酸去飽和酶基因(TaSSI1-1)的功能分析.pdf

1、SSI2基因編碼硬脂?；d體蛋白脂肪酸去飽和酶，催化硬脂酸生成油酸，擬南芥ssi2突變體增強(qiáng)了植株對(duì)細(xì)菌、卵菌病原菌和黃瓜花葉病毒的抗性。本研究從蘇麥3號(hào)中克隆到4個(gè)TaSSI2基因，通過生物信息學(xué)分析，亞細(xì)胞定位分析，激素誘導(dǎo)下的表達(dá)分析，并利用短柄草轉(zhuǎn)基因和BSMV-VIGS體系下調(diào)基因表達(dá)分析其在赤霉病抗性白粉病抗性方面的作用，對(duì)TaSSI2-1的分子生物學(xué)性質(zhì)進(jìn)行了鑒定。主要研究結(jié)果如下:
　　1.同源克隆得到小麥TaSS

2、I2-1、TaSSI2-2、TaSSI2-3、TaSSI2-4基因并進(jìn)行序列分析。TaSSI2-1與TaSSI2-2開放閱讀框(ORF)編碼392個(gè)氨基酸，兩者序列相似性為98％，TaSSI2-3ORF編碼391個(gè)氨基酸，TaSSI2-4ORF編碼333個(gè)氨基酸，兩者相似度為99％。聚類分析表明，TaSSI2-3、TaSSI2-4與已報(bào)道的OsSSI2具有較高相似性。
　　2.利用煙草和洋蔥表皮細(xì)胞進(jìn)行亞細(xì)胞定位分析，結(jié)果表明，T

3、aSSI2-1可能定位在高爾基體分泌的囊泡中。
　　3.實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析TaSSI2-1基因的表達(dá)。結(jié)果顯示，茉莉酸甲酯處理抑制TaSSI2-1基因的表達(dá)，處理24h后，抑制效果最明顯，表達(dá)量?jī)H為未處理時(shí)的5％。TaSSI2-1基因不響應(yīng)水楊酸的誘導(dǎo)。
　　4.利用BSMV-VIGS沉默TaSSI2-1基因后，輝縣紅提高了對(duì)白粉病的抗性。葉部離體培養(yǎng)鑒定TaSSI2-1基因下調(diào)后，增強(qiáng)了對(duì)禾谷鐮刀菌的敏感性，并且，在小

4、麥穗部沉默TaSSI2-1基因后，有利于赤霉菌的侵染和發(fā)生，說明TaSSI2-1基因在白粉病與赤霉病抗病過程中發(fā)揮不同的作用。
　　5.TaSSI2-1基因的短柄草遺傳轉(zhuǎn)化。在短柄草中過量表達(dá)TaSSI2-1基因，T2代純系進(jìn)行葉片離體培養(yǎng)鑒定，發(fā)現(xiàn)過表達(dá)TaSSI2-1基因可以提高短柄草對(duì)赤霉病的抗性。
　　6.BSMV-VIGS應(yīng)用的拓展。利用該技術(shù)成功沉默小麥近緣種粗山羊草AL8/78及野生二粒小麥AS14中的PDS基