甘藍型油菜顯性細胞核雄性不育相關(guān)基因2-I05功能研究.pdf

1、本研究在獲得了甘藍型油菜細胞核雄性不育相關(guān)基因2-I05 cDNA（GenBank登錄號EU306599）的基礎(chǔ)上，利用生物信息學方法對其進行分析，然后構(gòu)建反義抑制載體并轉(zhuǎn)化擬南芥和甘藍型油菜以明確該基因的功能和對擬南芥和甘藍型油菜植株生長和育性的影響。所做工作及主要結(jié)論如下：
　　 1．對雄性不育相關(guān)基因2-I05基因（GenBank登錄號EU306599）進行了生物信息學分析。2-I05的cDNA編碼357個氨基酸。其編碼蛋

2、白質(zhì)主要位于細胞核內(nèi)，在擬南芥中檢索到與之同源的RAD23-like蛋白，該蛋白是一種參與DNA核苷酸切除修復的蛋白質(zhì)。對來自不同植物的9個RAD23-like蛋白質(zhì)氨基酸序列的系統(tǒng)進化分析結(jié)果表明：RAD23-like在氨基酸序列上的進化與植物的進化基本保持一致，同科植物來源的RAD23-like蛋白質(zhì)較科間植物來源的遺傳變異小。
　　 2．構(gòu)建了基因2-I05反義抑制植物表達載體并對擬南芥進行了遺傳轉(zhuǎn)化。成功構(gòu)建了2-I05

3、反義抑制植物表達載體，并通過農(nóng)桿菌介導的花序浸染的方法將基因2-I05反義序列導入擬南芥Columbia中，收獲的種子經(jīng)30mg/L的潮霉素（Hyg）的抗性篩選，獲得了具有潮霉素抗性的T1代陽性植株23株。但因培養(yǎng)條件差，最終只有4株T1代擬南芥存活下來；經(jīng)PCR檢測驗證，其中有2株為陽性植株。
　　 3．對T2代擬南芥進行了潮霉素（Hyg）的抗性篩選、抗性植株P(guān)CR檢測、UV處理和RT-PCR檢測。RT-PCR結(jié)果表明：在組成

4、性啟動子的作用下，2-I05反義抑制基因能夠在花蕾、葉片中抑制野生型擬南芥中編碼RAD23-like蛋白質(zhì)的同源基因。UV處理結(jié)果表明，相對Columbia野生型而言，T2代擬南芥對UV更為敏感，說明2-I05基因其功能主要是參與了植物體UV損傷修復。實驗結(jié)果并未證實前人的這一假設(shè)即，參與植物體UV損傷修復的2-I05基因能引起植株不育；但該基因可能參與了雄蕊長度的調(diào)控。
　　 4．嘗試了用2種轉(zhuǎn)基因方法將基因2-I05反義抑制