中藥“連黃”對(duì)大腸埃希菌耐藥基因AcrA影響的初步研究.pdf

1、中藥“連黃”（精提，粗提）是本實(shí)驗(yàn)室以多味中藥按照不同的配比方法，經(jīng)過(guò)了大量的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)而篩選出來(lái)的科學(xué)組方。本研究采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）及實(shí)時(shí)熒光定量 PCR法，通過(guò)耐藥基因失活試驗(yàn)，檢測(cè)中藥“連黃”（精提，粗提）對(duì)大腸埃希菌的耐藥基因AcrA的影響，通過(guò)對(duì)中藥“連黃”（精提，粗提）作用前后的各耐藥菌株耐藥基因AcrA的mRNA表達(dá)水平進(jìn)行定量檢測(cè)并比較分析，研究中藥“連黃”（精提，粗提）對(duì)大腸埃希菌耐藥基因AcrA的mRNA表達(dá)

2、水平的影響，初步探討中藥“連黃”降低多重耐藥大腸埃希菌耐藥性的作用機(jī)制。
　　由瓊脂平板點(diǎn)種法結(jié)果可知，中藥“連黃”（精提，粗提）對(duì)耐藥大腸埃希菌 DL1的抑制率與敏感菌 K88比較差異不顯著（P>0.05），對(duì) NUT的抑制率與 K88比較差異顯著（p<0.05）。并且精提制劑與粗提制劑比較差異極顯著(p<0.01)。PCR法擴(kuò)增的DL1的AcrA基因與ECU00734的AcrA基因同源性達(dá)100％；其相應(yīng)的氨基酸序列同源性達(dá)1

3、00%；表明實(shí)驗(yàn)室成功擴(kuò)增出大腸埃希菌耐藥基因AcrA；NUT與ECU00734的AcrA基因同源性達(dá)99%。NUT與 ECU00734的同源性達(dá)98%。中藥“連黃”（精提，粗提）作用前后大腸埃希菌的耐藥基因 AcrA突變位點(diǎn)較集中，在608-693堿基區(qū)內(nèi)發(fā)生較大改變，其對(duì)應(yīng)的氨基酸序列也發(fā)生改變，且出現(xiàn)了氨基酸缺失。經(jīng)實(shí)時(shí)熒光定量 PCR法定量檢測(cè)的菌株 DL1、NUT的AcrA mRNA的表達(dá)量與相應(yīng)的中藥“連黃”（精提，粗提）作

4、用前菌株比較均發(fā)生了不同程度的降低。并且精提制劑比粗提制劑對(duì)AcrA mRNA的表達(dá)量影響更大，mRNA的表達(dá)量降低程度更明顯。
　　中藥“連黃”（精提，粗提）在亞抑菌濃度下可有效的降低大腸埃希菌的四環(huán)素類，氯霉素類和喹諾酮類藥物的耐藥性；其降低多重耐藥大腸埃希菌耐藥性的作用機(jī)制是由于改變了其耐藥基因AcrA的部分堿基，使AcrA基因 mRNA的表達(dá)量發(fā)生改變，中藥“連黃”（精提，粗提）在亞抑菌濃度下對(duì)大腸埃希菌耐藥基因AcrA的