土壤煙草青枯病菌的分離鑒定及硼酸鈉對該菌的影響.pdf

1、本文以重要的經(jīng)濟(jì)作物的病原細(xì)菌——煙草青枯病菌為研究對象,研究并建立了一套成本低廉、簡單快速的土壤青枯病菌分離檢測方法。本實(shí)驗(yàn)重點(diǎn)在于研究硼酸鈉對煙草青枯病菌的影響,分析硼酸鈉對煙草青枯病菌影響的機(jī)理,為開發(fā)新型土壤改良劑提供理論依據(jù)。全文的主要結(jié)論如下:
　　 1、土壤中白肋煙青枯病菌的分離鑒定與生化型分析
　　 為了建立一套成本低廉、簡單快速的土壤青枯病菌分離檢測方法,本研究將半選擇性培養(yǎng)基(PCCG)和PCR技術(shù)相

2、結(jié)合,從白肋煙栽培土壤中分離鑒定出12個菌株,并分析了這12個菌株的ITS序列.結(jié)果表明:分離的12個菌株ITS序列與與青枯病菌同源性最高,表明該方法適合于土壤中青枯病菌的分離鑒定。此外,根據(jù)Hayward的青枯病菌生化型鑒定方法試驗(yàn)結(jié)果表明12個菌株均為生化型Ⅲ。
　　 2、硼酸鈉對煙草青枯病菌在馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)液中生長的菌影響
　　 在其他條件最優(yōu)的情況下,硼酸鈉對煙草病菌的生長有著顯著的抑制作用。硼酸鈉的抑制作用與硼

3、酸鈉的濃度呈正相關(guān)。隨著硼酸鈉的濃度的不斷升高,煙草青枯病菌的生長量不斷降低,其生長抑制率不斷上升,最高可達(dá)到94.7%。
　　 3、硼酸鈉對煙草青枯病菌在無菌水中生存的影響
　　 在沒有營養(yǎng)物質(zhì)存在的條件下,硼酸鈉對煙草青枯病菌的生存有顯著影響。隨著時間的推移,煙草青枯病菌數(shù)量逐漸減少。當(dāng)硼酸鈉濃度達(dá)到80mmol/L時,煙草青枯病菌隨著時間的推移不斷減少,17天時青枯病菌全部致死。
　　 4、硼酸鈉對土壤中煙

4、草青枯病菌生長的影響
　　 當(dāng)硼酸鈉到一定濃度時可以抑制土壤中煙草青枯病菌的生長。土壤中煙草青枯病菌的菌濃度與土壤中硼酸鈉的濃度呈負(fù)相關(guān)。隨著時間的推移,煙草青枯病菌逐漸停止生長,其數(shù)量也逐漸減少。土壤中硼酸鈉濃度越高,煙草青枯病菌菌濃度越低,致死速度越快。煙草青枯病菌在土壤中的存活與生長均被硼酸鈉顯著抑制。
　　 5、硼酸鈉對煙草青枯病菌胞外多糖的影響
　　 硼酸鈉對于單個煙草青枯病菌產(chǎn)胞外多糖的量的影響不大,

5、硼酸鈉通過影響煙草青枯病菌的生長量來影響總胞外多糖量。
　　 6、硼酸鈉對煙草青枯病菌胞內(nèi)蛋白和胞外蛋白的影響
　　 經(jīng)電泳、考馬斯亮藍(lán)染色、脫色后,凝膠成像系統(tǒng)下觀察SDS-PAGE膠。硼對青枯菌胞內(nèi)及胞外蛋白表達(dá)均有顯著影響,從加入0.5mmol/L硼酸鈉的培養(yǎng)基制備出來的青枯菌樣品中選擇了2個蛋白點(diǎn),分別是胞內(nèi)蛋白1號和胞外蛋白2號。MascotSearch的結(jié)果顯示青枯菌在0.5mmol/L硼酸鈉的作用下,其胞內(nèi)

6、蛋白1號差異條帶與RalstoniasolanacearumGM11000的一種信號肽一致性最高;其胞外蛋白2號差異條帶與RalstoniasolanacearumGM11000的TEK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)。說明硼酸鈉對煙草青枯病菌的影響可能與青枯病菌的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)有關(guān),具體分析有待進(jìn)一步研究。
　　 7、硼酸鈉對煙草青枯病纖維素酶的影響
　　 硼酸鈉顯著影響煙草青枯病菌產(chǎn)纖維素酶活性。隨著硼酸鈉濃度的升高,纖維素酶活性快速降低。當(dāng)