萊克多巴胺膠體金試紙條的研制.pdf

1、簍萎大學(xué)工程碩士專業(yè)學(xué)位論文萊克多巴胺膠體金試紙條的研制StudyontheRactopamineColloidalGoldTestStrip萊克多巴胺膠體金試紙條的研制摘要萊克多巴胺是一種Bz腎上腺素受體激動劑，當(dāng)添加到飼料中，可以提高動物的瘦肉率。但是當(dāng)人食用了含有超過一定劑量萊克多巴胺的動物組織后，就會對人體造成不同程度的傷害。目前，對萊克多巴胺的檢測主要是采用色譜法，但色譜法的前處理過程繁瑣、成本高、需要專門的檢測儀器，這不適合

2、大規(guī)模的推廣。故建立一個高效、快速的萊克多巴胺檢測方法具有重要的現(xiàn)實意義。本實驗采用檸檬酸三鈉還原的方法來制備膠體金。采用單因素試驗，通過改變檸檬酸三鈉加入量、加熱時間、轉(zhuǎn)速和反應(yīng)物的添加順序，對膠體金制備工藝進(jìn)行優(yōu)化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在1％檸檬酸三鈉溶液加入量為18mL、加熱時間10min、轉(zhuǎn)速為300r／min條件下，采用檸檬酸三鈉加入到氯金酸的添加順序可以制備質(zhì)量較好的膠體金溶液。采用紫外可見光譜法確定膠體金顆粒的粒徑和均一度。通過實驗發(fā)

3、現(xiàn)，所制備的膠體金粒徑大約在184nln，通過觀察膠體金溶液的可見光譜，發(fā)現(xiàn)膠體金的均一度也比較好。優(yōu)化了免疫膠體金的制備條件，最佳蛋白標(biāo)記量為1318lg／mL，最適標(biāo)記pH為80，選擇終濃度為l％BSA為穩(wěn)定劑。對比了不同配方的重懸液，確定了配方2為含有1％BSA、1％蔗糖、01％Tween一20的磷酸鹽緩沖液。優(yōu)化了抗原和抗體的包被條件，抗原包被濃度為05mg／mL，二抗包被濃度為10rag／mE，金標(biāo)稀釋度為3倍，金標(biāo)墊干燥條件

4、為室溫條件下45rain，抗原包被條件為37℃，10rain。對比了三種不同型號的金標(biāo)墊(MA0270、GL0194和Ahlstrom8964)，三種不同型號硝酸纖維素膜(Sartorius140、Millipore135和PallVivid170)，四種不同型號的樣品墊(GL—b01、GLb02、GL—b03和GL。b04)、三種不周型號的吸水紙(HS5076、HS5080和HS5072)對試紙條性能的影響，最終選擇金標(biāo)墊的型號為MA

5、0270，Millipore135硝酸纖維素膜的型號為Millipore135，樣品墊的型號為GLb01，吸水紙的型號為HS5072。試紙條的靈敏度為20ng／mL，交叉反應(yīng)實驗說明所制各的試紙條與克倫特羅、沙丁胺醇、腎上腺素?zé)o交叉反應(yīng)。在室溫下試紙條可以保存2個月以上，在不同批次和同一批次內(nèi)重復(fù)性良好。對試紙條在實際檢測中的表現(xiàn)進(jìn)行了測試，樣品經(jīng)過簡單的提取和除脂肪后，直接用于試紙條的測試，和傳統(tǒng)的LCMS的前處理方法相比較簡便了很多