粘帚霉GR菌株高產(chǎn)β-1，3-葡聚糖酶誘變、酶分離與性質(zhì)研究及菌株鑒定.pdf

1、GR菌株是一株生防真菌，對多種病原菌具有抑制作用。對該菌菌落形態(tài)、分生孢子形態(tài)與產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)進行觀察，結(jié)合ITS DNA序列分析，將GR菌株初步鑒定為粉紅粘帚霉。
　　 GR菌株能分泌β-1，3-葡聚糖酶。用粗酶液進行抑菌試驗表明，其對水稻紋枯病菌和棉花黃萎病菌菌絲生長具有明顯的抑制作用，還能導致水稻紋枯病菌菌絲顏色變淺，細胞腫脹，原生質(zhì)體濃縮，嚴重的出現(xiàn)菌絲斷裂；使棉花黃萎病菌菌絲頂端細胞膨大呈球形，甚至破裂，原生質(zhì)體外滲。

2、>　　 用紫外線對GR菌株進行誘變，獲得一株產(chǎn)β-1，3-葡聚糖酶活性增加的突變株GR-6，其酶活性是親本菌株的2.8倍，且其產(chǎn)酶性狀能穩(wěn)定遺傳。對突變株GR-6進行生物學特性檢測，與親本菌株相比，生長速度、分生孢子產(chǎn)生等性狀基本相似，因此GR-6是較為理想的高產(chǎn)β-1，3-葡聚糖酶的生防菌株。
　　 GR-6產(chǎn)生的β-1，3-葡聚糖酶能夠用60％丙酮完全沉淀，懸浮于緩沖液中得粗酶液。粗酶液經(jīng)過DE52離子交換層析，在280n

3、m處有5個吸收峰，其中峰4具有β-1，3-葡聚糖酶活性，且含量最高；收集峰4蛋白將其再經(jīng)Sephadex G-75凝膠柱層析，在280nm處有3個活性峰，其中峰4-1為具有酶活性的蛋白峰。對4-1蛋白進行SDS-PAGE電泳，展現(xiàn)一條蛋白帶，分子量為41.1kDa。
　　 GR-6產(chǎn)生的β-1，3-葡聚糖酶的最適反應溫度為50℃，最適反應pH為4～5，β-1，3-葡聚糖酶活性穩(wěn)定性測試結(jié)果表明，酶液在50℃以下溫度處理30min

4、，酶解性質(zhì)穩(wěn)定，但60℃處理30min后活性明顯下降。酶液在pH5條件下處理2h，活性基本不變，但在pH4、pH6時活性明顯降低。該葡聚糖酶對一些金屬離子較敏感，如Ca2+、Zn2+、Fe2+、Fe3+、Ba2+等使酶活性顯著降低，而Mn2+和K+對酶活性沒有明顯的影響。
　　 對GR-6菌株產(chǎn)β-1，3-葡聚糖酶的培養(yǎng)條件進行了優(yōu)化，得出最佳碳源為2％葡聚糖，最佳氮源為0.7％硝酸銨，培養(yǎng)基pH值為5，培養(yǎng)溫度為26℃，培養(yǎng)時