小麥E2基因的克隆及其在葉銹菌侵染過程中的表達(dá)分析.pdf

1、E2即泛素結(jié)合酶，在植物的泛素-蛋白酶體途徑中起到重要的作用。本項(xiàng)研究工作是在前期工作的基礎(chǔ)上開展的。本實(shí)驗(yàn)室閻愛華等構(gòu)建了小麥與葉銹菌不親和互作早期不同時(shí)間點(diǎn)的SSH文庫，并從中篩選出了一些受葉銹菌侵染而誘導(dǎo)表達(dá)的基因，其中就包含E2基因。本試驗(yàn)在此基礎(chǔ)上，利用RT-PCR和Western-blotting技術(shù)分別在mRNA水平和蛋白質(zhì)水平對(duì)不同親和性組合中葉銹菌侵染后不同時(shí)間E2的表達(dá)特征進(jìn)行了檢測。并利用擬南芥突變體對(duì)該基因在非生

2、物脅迫方面的功能做了初步檢測。通過構(gòu)建真核表達(dá)載體，利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化技術(shù)轉(zhuǎn)化擬南芥，得到超表達(dá)TaE2基因的擬南芥植株T1代。獲得的主要結(jié)果如下:
　　 1.利用RT-PCR技術(shù)從小麥幼苗葉片中克隆獲得了TaE2基因的CDS區(qū)。
　　 2.利用生物信息學(xué)分析人工合成了TaE2抗原表位的多肽片段，通過免疫新西蘭兔獲得效價(jià)較高特異性較強(qiáng)的抗TaE2的兔抗血清。
　　 3.通過檢測TaE2在mRNA和蛋白水平表達(dá)量的變化

3、，得出其變化趨勢基本一致在不親和組合中TaE2的表達(dá)上調(diào)時(shí)間早于親和組合。初步表明該基因可能參與了小麥抵抗葉銹菌侵染的防衛(wèi)反應(yīng)。
　　 4.通過分子驗(yàn)證獲得擬南芥E2基因突變純合體，經(jīng)不同的非生物脅迫試驗(yàn)初步證明AtE2基因與植物的抗鹽和抗旱相關(guān)。
　　 5.構(gòu)建了pSuper1300+-TaE2的真核表達(dá)載體，運(yùn)用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化擬南芥獲得了超表達(dá)TaE2基因的T1代植株。
　　 以上結(jié)果為進(jìn)一步研究和探討TaE2在