顆粒污泥反硝化除磷優(yōu)勢(shì)菌種的分離與鑒定.pdf

1、水體的富營(yíng)養(yǎng)化已經(jīng)成為日趨嚴(yán)重世界性問題，氮和磷是引起水體富營(yíng)養(yǎng)化的主要因素。生物脫氮除磷技術(shù)因此受到了越來越廣泛的關(guān)注。反硝化除磷菌(DenitrifyingPhosphorus Removing Bacteria，DPB)是一類同時(shí)完成反硝化和聚磷的微生物，在厭氧條件下，DPB可以利用有機(jī)物合成聚-β-羥基丁酸(PHB)并儲(chǔ)存在細(xì)胞內(nèi)，釋放正磷酸鹽;在缺氧條件下，它可以PHB為碳源，以NOx-為電子受體進(jìn)行反硝化，同時(shí)超量聚磷。目前

2、已鑒定的反硝化除磷細(xì)菌有寡營(yíng)養(yǎng)單胞菌屬（Stenotrophomonas sp.）、不動(dòng)桿菌屬（Acinetobacter sp.）、假單胞菌屬（Pseudomonas sp.）、莫拉氏菌屬(Moraxellasp.)、氣單胞菌屬（Aeromonas sp.）和腸桿菌屬（Enterobacter sp.）。
　　 為了鑒定顆粒污泥中的反硝化除磷優(yōu)勢(shì)菌種，本研究首先對(duì)污泥顆粒中所含菌種進(jìn)行DGGE分析;然后通過純化培養(yǎng)，缺陷篩選具

3、有反硝化除磷功能的菌種;在此基礎(chǔ)上對(duì)獲得的菌種進(jìn)行細(xì)胞學(xué)、生理生化和分子生物學(xué)鑒定。結(jié)果如下:
　　 顆粒污泥中細(xì)菌種群分析。從污泥中提取DNA，采用DGGE技術(shù)和測(cè)序方法分析細(xì)菌種群結(jié)構(gòu)。結(jié)果顯示，在獲得的12個(gè)種群中，共有1個(gè)索氏菌屬(Thauera sp.)、3個(gè)發(fā)硫菌屬（Thiothrix sp.）、2個(gè)不動(dòng)桿菌屬(Acinetobacter sp.)和6個(gè)不可培養(yǎng)細(xì)菌菌種。在這些種群中，只有不動(dòng)桿菌屬(Acinetob

4、acter sp.)具有一定的反硝化除磷功能，因此推測(cè)不動(dòng)桿菌為優(yōu)勢(shì)菌種。
　　 優(yōu)勢(shì)細(xì)菌種群的分離與鑒定。通過在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基進(jìn)行平板涂布培養(yǎng)，經(jīng)純化培養(yǎng)得到菌落形態(tài)、生長(zhǎng)時(shí)間各不相同的24個(gè)菌株，將得到的分離菌株在三種缺陷篩選培養(yǎng)基上進(jìn)行依次篩選，三種培養(yǎng)基分別是反硝化篩選培養(yǎng)基，缺磷缺陷培養(yǎng)基，富磷缺陷培養(yǎng)基。最終共得到兩株菌株，分別是DPB-F2和DPB-F5。對(duì)這兩個(gè)菌株進(jìn)行16S rDNA序列的PCR擴(kuò)增及測(cè)序，