獸藥殘留檢測(cè)邵匯總

1、《食品理化檢驗(yàn)》 黎源倩 主編,第七章食品中獸藥殘留量的分析,第一節(jié) 概 述,使用獸藥的目的,獸藥的主要用途有：防病治病、促進(jìn)生長(zhǎng)、提高飼料利用率、改善動(dòng)物性食品的品質(zhì)等。,獸藥和獸藥殘留,獸藥：預(yù)防和治療畜禽疾病的藥物；促進(jìn)生長(zhǎng)、提高生產(chǎn)性能、改善動(dòng)物性食品的品質(zhì)；也包括一些化學(xué)的、生物的動(dòng)物保健品或飼料添加劑。獸藥殘留：“獸藥在動(dòng)物性食品中的殘留”的簡(jiǎn)稱，是指動(dòng)物產(chǎn)品的任何可食部分所含獸藥的母體化合物及（或）其代謝物

2、，以及與獸藥有關(guān)的雜質(zhì)。,抗生素類：四環(huán)素、氯霉素、磺胺類、呋喃類等；β-興奮劑：鹽酸克倫特羅、己烯雌酚、孕酮等；激素：己烯雌酚、孕酮等； 抗寄生蟲類：左旋咪唑、苯丙咪唑、克并咪唑、克球酚、吡喹酮等。,獸藥殘留的類型,非法使用違禁或淘汰藥物； 不遵守休藥期規(guī)定； 濫用藥物； 違背有關(guān)標(biāo)簽的規(guī)定； 屠宰前用藥。,獸藥殘留產(chǎn)生的原因,獸藥殘留的來(lái)源,在食品動(dòng)物體內(nèi)或動(dòng)物性食品中發(fā)現(xiàn)的違章殘留,大都是由用藥錯(cuò)誤造成的,其原因主要

3、有:①不正確地應(yīng)用藥物,如用藥劑量、給藥途徑、用藥部位和用藥動(dòng)物的種類等不符合用藥指示,這些因素有可能延長(zhǎng)藥物殘留在體內(nèi)的時(shí)間,從而需要增加休藥的天數(shù);②在休藥期結(jié)束前屠宰動(dòng)物;③屠宰前用藥掩飾臨床癥狀,以逃避屠宰前檢查;④ 以未經(jīng)批準(zhǔn)藥物作為添加劑飼喂動(dòng)物;,,⑤藥物標(biāo)簽上的用法指示不當(dāng),造成違章殘留物;⑥飼料粉碎設(shè)備受污染或?qū)⑹⑦^(guò)抗菌藥物的容器用于貯藏飼料;⑦接觸廄舍糞尿池中含有抗生素等藥物的廢水和排放的污水(如豬經(jīng)常攝

4、入這種污水);⑧任意以抗生素藥渣喂豬或其他食品動(dòng)物等濫用抗生素,是出現(xiàn)抗生素殘留的主要原因。,,美國(guó)食品藥物管理局(FDA)和美國(guó)獸醫(yī)中心(CVM)的調(diào)查結(jié)果表明,引起違章藥物殘留的常見原因?yàn)?①不遵守休藥期;②使用未經(jīng)批準(zhǔn)的藥物;③未做用藥記錄;④飼料加工或運(yùn)送錯(cuò)誤;⑤盛放它種藥物的貯存容器未充分清洗干凈等。,獸藥殘留:殘留在動(dòng)物性食品中獸藥原形式、代謝物和雜質(zhì)。,獸藥分類：抗生素類：包括青霉素、鏈霉素、金霉素、土霉素、

5、四環(huán)素、泰樂(lè)菌素等。呋喃藥類：包括呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃呾啶等?；前匪庮悾嚎骨蛳x藥：激素藥類：驅(qū)蟲藥類：,獸藥殘留的危害,毒性作用：急性、慢性、三致 耐藥性：耐藥菌株傳遞給人 過(guò)敏反應(yīng)：青霉素、磺胺類等 激素（樣）作用：潛在致癌性、發(fā)育毒性（兒童性早熟）等 污染環(huán)境，影響生態(tài)：進(jìn)入環(huán)境仍有活性,獸藥殘留限量標(biāo),90年代開始監(jiān)控工作，2002最新《動(dòng)物性食品中最高殘留限量》：可用，不限量：88可用，需限量：94可

6、用，不得檢出9禁用，不得檢出：31,我國(guó)食品中部分獸藥的最高殘留限量,獸藥殘留限量標(biāo)準(zhǔn),獸藥殘留分析技術(shù)的特點(diǎn)待測(cè)物質(zhì)濃度低樣品基質(zhì)復(fù)雜，干擾物質(zhì)多獸藥殘留代謝產(chǎn)物多樣或不明動(dòng)物種類多樣，對(duì)藥物代謝存在差異,獸藥殘留的檢驗(yàn)方法,對(duì)檢測(cè)方法的要求快速高通量定量準(zhǔn)確度和精確度確證,獸藥殘留的檢驗(yàn)方法,理想的儀器裝備樣品經(jīng)簡(jiǎn)單處理即可上機(jī)測(cè)定不需萃取和凈化快速、準(zhǔn)確的定量分析自動(dòng)的資料處理,分析方法的總體思路高水

7、平(Level Ⅰ)方法——確證和定量被分析物質(zhì) 中等水平(Level Ⅱ)方法——定量但不需要確證被分析物質(zhì)低水平(Level Ⅲ)方法——篩選,ELISA：簡(jiǎn)單、快速、靈敏度，但容易產(chǎn)生假陽(yáng)性，一般只適用進(jìn)行樣品粗篩，陽(yáng)性結(jié)果需進(jìn)行確證。 GC：靈敏度較高，但大多數(shù)獸藥極性或沸點(diǎn)偏高，需繁瑣的衍生化步驟，限制了應(yīng)用。HPLC：操作簡(jiǎn)單，但靈敏度不高；某些殘留，檢出限達(dá)不到要求。儀器聯(lián)用：分離、定性、定量一體，靈敏、準(zhǔn)確、選

8、擇性都高，是國(guó)際公認(rèn)的確認(rèn)方法。 GC/MS、LC/MS等,獸藥殘留的分析方法,篩選方法,檢測(cè)和確認(rèn)方法：理化檢驗(yàn)技術(shù)（GC、HPLC、TLC、GC-MS、HPLC-MS等）。,,獸藥殘留的分析方法,獸藥殘留的檢驗(yàn)分析方法包括篩選、檢測(cè)和確認(rèn)。,GC和GC-MS的區(qū)別,GC是指氣相色譜儀。 一般來(lái)說(shuō) 氣象色譜儀使用的檢測(cè)器 有npd fid fpd ecd等等如果氣象色譜器沒(méi)加上述常用檢測(cè)器 而是用質(zhì)譜當(dāng)做檢測(cè)器 那么就是GC-MS了

9、，GC-MS一般指的是單級(jí)質(zhì)譜 如果是二級(jí)質(zhì)譜就是 GC-MS-MS了。GC就是一個(gè)分離裝置 嚴(yán)格說(shuō) GC是沒(méi)法單獨(dú)用的 必須加檢測(cè)器 只不過(guò)人們習(xí)慣吧 GC-FID 、GC-ECD、GC-FPD等等 簡(jiǎn)稱為GC而已。,氣相色譜檢測(cè)器,熱導(dǎo)檢測(cè)器,氫火焰離子檢測(cè)器,電子捕獲檢測(cè)器,火焰光度檢測(cè)器,質(zhì)譜檢測(cè)器,TCD thermal conductivity detector,FPD flame photometric detecto

10、r,FID hydrogen flame ionization detector,MSD mass spectrum detector,ECD electron capture detector,質(zhì)譜分析Mass Spectrometry，MS,質(zhì)譜分析法是通過(guò)對(duì)被測(cè)樣品離子的質(zhì)荷比的測(cè)定來(lái)進(jìn)行分析的一種分析方法。化合物分子受到電子流沖擊后，形成的帶正電荷分子離子及碎片離子，按照其質(zhì)量m和電荷z的比值m/z（質(zhì)荷比）大小依次排列而被

11、記錄下來(lái)的圖譜，稱為質(zhì)譜。,質(zhì)譜分析的過(guò)程與原理,24,1、進(jìn)樣化合物通過(guò)汽化引入離子化室；,2、離子化在離子化室，組分分子被一束加速電子碰撞（能量約70eV），撞擊使分子電離形成正離子；M —— M+ + e或與電子結(jié)合，形成負(fù)離子M + e —— M—,,25,26,5、加速離子進(jìn)入一個(gè)強(qiáng)度為H的磁場(chǎng)，發(fā)生偏轉(zhuǎn)，半徑為：,不同的物質(zhì)有不同的質(zhì)量譜——質(zhì)譜，利用這一性質(zhì)，可以進(jìn)行定性分析（包括分子質(zhì)量和相關(guān)結(jié)構(gòu)信息）；譜峰強(qiáng)

12、度也與它代表的化合物含量有關(guān)，可以用于定量分析。,化合物C5H12O的質(zhì)譜圖,GC-MS的基本流程,,GC-MS聯(lián)用的優(yōu)缺點(diǎn),色譜儀有很強(qiáng)的分離混合物的能力，但是對(duì)化合物定性的能力差。質(zhì)譜分析試樣必須是高度純凈物，而質(zhì)譜本身無(wú)分離混合物的能力，但是能用來(lái)測(cè)定化合物的相對(duì)分子質(zhì)量和化學(xué)結(jié)構(gòu)，是一個(gè)優(yōu)良的定性工具。,GC-MS聯(lián)用的優(yōu)缺點(diǎn),氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用的時(shí)候，氣相色譜法分離效能高，定量準(zhǔn)確，故氣相色譜儀是質(zhì)譜法的理想分離器；同樣，

13、質(zhì)譜法靈敏度高，定性能力強(qiáng)，幾乎能檢查出所有的有機(jī)化合物，故質(zhì)譜儀是氣相色譜法的理想檢測(cè)器。氣相色譜首先對(duì)揮發(fā)性的物質(zhì)進(jìn)行分離、定量；質(zhì)譜法再通過(guò)測(cè)定離子質(zhì)量和強(qiáng)度來(lái)進(jìn)行成分分析和結(jié)構(gòu)分析。因此，采用兩者的聯(lián)用，綜合其優(yōu)點(diǎn)，克服其不足。,獸藥殘留的檢驗(yàn)方法,第二節(jié) 食品中抗生素類獸藥殘留檢驗(yàn),四環(huán)素類抗生素的殘留檢驗(yàn) 氯霉素類抗生素的殘留檢驗(yàn) 磺胺類獸藥殘留檢驗(yàn) 硝基呋喃類獸藥殘留檢驗(yàn),四環(huán)素類抗生素的殘留檢驗(yàn),常用的四環(huán)素

14、類四環(huán)素、土霉素、金霉素等允許使用，最高殘留有限量 常用的測(cè)定方法HPLC、TLC、ELISA等,HPLC法測(cè)定四環(huán)素類獸藥殘留原理：樣品提取，微孔濾膜過(guò)濾，反相色譜柱（ODS柱）分離，紫外檢測(cè)器檢測(cè)。樣品處理：5%高氯酸提取、離心、過(guò)濾。測(cè)定時(shí)流動(dòng)相中加入NaH2PO4，調(diào)節(jié)pH=2.5，可改善分離度及峰形。當(dāng)pH<pI時(shí)，蛋白質(zhì)以陽(yáng)離子形式存在，高氯酸與之沉淀，離心除去。,四環(huán)素類抗生素的殘留檢驗(yàn),,,,,（A

15、）空白養(yǎng)殖蝦樣品 （B）四種四環(huán)素類藥物的養(yǎng)殖蝦樣品,,定量方法：用系列標(biāo)準(zhǔn)品的濃度～峰面積（峰高）繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，應(yīng)該是一條通過(guò)原點(diǎn)的直線。,氯霉素類抗生素的殘留檢驗(yàn),常用的氯霉素類（CAPs）氯霉素、無(wú)味氯霉素、乙酰氯霉素、甲砜霉素、弗甲砜霉素骨髓細(xì)胞、肝細(xì)胞毒性禁用，不得檢出 常用的測(cè)定方法GC、HPLC、LC-MS、ELISA等,氣相色譜法原理：樣品提取、凈化、衍生化，毛細(xì)管氣相色譜柱分離，電子捕獲檢測(cè)器檢測(cè)。樣

16、品處理：乙氰提取、離心—SPEC18柱凈化-衍生化,氯霉素類抗生素的殘留檢驗(yàn),,,,,氯霉素類抗生素的殘留檢驗(yàn),LC-MS法檢測(cè)（確認(rèn)檢驗(yàn)）原理：乙酸乙酯提取，濃縮后水解，固相萃取柱凈化，LC-MS聯(lián)用檢測(cè)GB-T 22338-2008 動(dòng)物源性食品中氯霉素類藥物殘留量測(cè)定,,,磺胺類（SAs）獸藥殘留檢驗(yàn),常用的磺胺類獸藥磺胺嘧啶、磺胺甲噁唑、磺胺甲氧嘧啶、磺胺二甲基嘧啶對(duì)過(guò)敏反應(yīng)者有致敏作用；積蓄有肝腎毒性；還可影響造血系統(tǒng)

17、我國(guó)規(guī)定殘留限量≤0.1mg/kg,磺胺類藥物結(jié)構(gòu),基本結(jié)構(gòu)為對(duì)氨苯磺酰胺，簡(jiǎn)稱磺胺， 具有芳氨基和磺酰胺基，多為兩性化合物,,,,,磺胺類藥物的分子結(jié)構(gòu),磺胺類獸藥殘留檢驗(yàn),HPLC法測(cè)定磺胺類獸藥殘留（最常用）原理：乙腈提取，正己烷萃取除脂，加入正丙醇減壓干燥，殘留物用乙腈溶解，氧化鋁柱凈化，加入正丙醇，減壓干燥，流動(dòng)相溶解，HPLC紫外檢測(cè)器檢測(cè)。,磺胺類藥物的HPLC法色譜條件,常用反相柱分離，有C18、C8或者C4柱，也用

18、離子對(duì)色譜柱。磺胺類藥物在色譜柱上的保留值不僅受流動(dòng)相的極性影響，還會(huì)受磺胺類藥物的解離形式的影響，因此，流動(dòng)相的pH值對(duì)色譜分離的效果起重要作用。,磺胺類藥物的HPLC法色譜條件,流動(dòng)相主要由乙睛-水，甲醇-水或者乙睛-甲醇-水按不同比例組成，文獻(xiàn)采用乙醇-水系統(tǒng)。在以上流動(dòng)相系統(tǒng)中加入適量乙酸或十二烷基磺酸鈉（SDS）用于提高分離效率。,,方法說(shuō)明磺胺類最大吸收λ為260nm~280nm，檢測(cè)時(shí)選用λ=270nm。樣品極性較強(qiáng)

19、，70%乙腈的極性要大于95%乙腈，洗脫效果更好。凈化時(shí)用堿性氧化鋁。,硝基呋喃類（NFs）獸藥殘留檢驗(yàn),概述硝基呋喃類及其代謝物可使動(dòng)物癌變和基因突變禁用，在動(dòng)物性食品和飼料中不得檢出常用ELISA、HPLC、LC-MS檢測(cè),HPLC法測(cè)定禽肉中呋喃唑酮原理：樣品與C18柱填料研磨，混合裝柱，正己烷淋洗，乙酸乙酯洗脫，濃縮，溶解，氧化鋁柱凈化，檢測(cè)方法說(shuō)明基質(zhì)固相分散技術(shù),硝基呋喃類獸藥殘留檢驗(yàn),第三節(jié)鹽酸克倫特羅殘留

20、的檢驗(yàn),概述 鹽酸克倫特羅獸藥殘留的檢驗(yàn),20世紀(jì)70年代末,美國(guó)等發(fā)達(dá)國(guó)家進(jìn)行了鹽酸克倫特羅實(shí)用性開發(fā)研究工作,至80年代,鹽酸克倫特羅作為飼料添加劑被廣泛應(yīng)用到畜禽生產(chǎn)中。1996年,我國(guó)一些大專院校、科研單位研究發(fā)現(xiàn),鹽酸克倫特羅對(duì)動(dòng)物具有加強(qiáng)脂肪分解,促進(jìn)蛋白質(zhì)合成,實(shí)現(xiàn)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)再分配,提高胴體瘦肉率,加快動(dòng)物生長(zhǎng)等作用。養(yǎng)豬戶在不改變管理模式、不增加飼料投入、不提高蛋白質(zhì)的前提下,在育肥豬出欄前25～30d投喂鹽酸克倫特羅,

21、就能將瘦肉率提高10%,育肥增重提高10%～12%,因此在畜牧業(yè)生產(chǎn)中被大量使用。,概 述,概 述,理化性質(zhì)Clenbuterol，簡(jiǎn)稱CLB，β-興奮劑溶解性：易溶于水、乙醇，微溶于丙酮，不溶于乙醚。化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定：瘦肉精化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，不易破壞。172℃開始分解，經(jīng)260℃油煎5min才會(huì)破壞減半?？诜笤谖改c吸收迅速，10-20min起效，2-3h血液濃度達(dá)到峰值，作用維持5h左右，半衰期25-39h，消除5個(gè)半衰期（約97

22、%）需5-8d。易在動(dòng)物眼睛、毛發(fā)、肝、肺、腎等組織中蓄積。我國(guó)食品中的限量：馬、牛肌肉0.1µg/kg，肝、腎0.5µg/kg，牛奶0.05µg/kg。,概述,藥理性質(zhì)和毒性曾用于防治人、畜支氣管哮喘和痙攣后用于促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)、提高瘦肉率人食用含CLB殘留畜產(chǎn)品后的表現(xiàn)為危害肝臟和腎臟。長(zhǎng)期攝入可致染色體畸變，誘發(fā)惡性腫瘤。,概述,CLB檢驗(yàn)、檢疫現(xiàn)狀1987年，歐盟、美國(guó)宣布禁止使用CLB作獸用

23、飼料添加劑目前，歐盟成員國(guó)已將CLB殘留作為肉品進(jìn)口必檢項(xiàng)目我國(guó)政府也于97年發(fā)文禁止在飼料中添加使用CLB,CLB殘留量的檢驗(yàn),感官檢測(cè) 健康肉暗紅色，肉質(zhì)彈性好，無(wú)“出汗”現(xiàn)象；“問(wèn)題肉”特別鮮紅，脂肪非常薄，瘦肉纖維疏松，有“出汗”現(xiàn)象。 ELISA法測(cè)定 特異性強(qiáng)、靈敏度高、酶標(biāo)板上一次可作多份樣品檢測(cè)；快速篩選方法。,GC-MS測(cè)定法,原理：樣品剪碎，高氯酸勻漿，超聲波加熱提取，異丙醇-乙

24、酸乙酯萃取，濃縮，弱陽(yáng)離子交換柱分離，洗脫，濃縮后衍生化，測(cè)定,GC-MS測(cè)定法-樣品處理,提?。喝鈽?高氯酸勻漿-超聲波提取-水浴加熱-冷卻離心取上清-調(diào)PH9.5±0.1-氯化鈉、異丙醇-乙酸乙酯提取-旋轉(zhuǎn)水浴蒸發(fā)至近干-Na2H2PO4溶解-過(guò)濾- Na2H2PO4定容。,GC-MS測(cè)定法-樣品處理,凈化和濃縮：離子交換柱-洗脫液（乙醇-氨洗脫）-氮?dú)鉂饪s至干。衍生化：甲醇溶解殘?jiān)?濃縮至干-衍生劑BSTFA-蒸干-甲

25、苯定容，待用。標(biāo)準(zhǔn)系列同時(shí)衍生化。,GC-MS測(cè)定法-說(shuō)明,1.肉要先絞碎成肉糜。2.該方法的檢出限是0.5µg/kg。3.0.1mol/L的高氯酸勻漿，超聲波萃取，離心，液-液萃取，效果好。4.加入NaCl，液-液萃取時(shí)可防止乳化。5.衍生化前先凈化，可以避免雜質(zhì)衍生化，干擾測(cè)定。,,,美托洛爾,HPLC測(cè)定法,原理：樣品提取、凈化，乙醇-氨洗脫后濃縮，流動(dòng)相定容后HPLC測(cè)定樣品處理：提取、凈化濃縮同GC-MS，

26、不需要衍生化。,HPLC測(cè)定法,方法說(shuō)明：該方法適用于各種食品以及肝、腎等組織及湯汁中瘦肉精的測(cè)定。標(biāo)準(zhǔn)品要臨用時(shí)新鮮配制，避光保存。除GC-MS和HPLC法外，還可用ELISA法進(jìn)行篩選，再用上述方法確認(rèn)。,,,酶聯(lián)免疫法,基于抗原抗體反應(yīng)競(jìng)爭(zhēng)性抑制進(jìn)行測(cè)定的。,GB/T 5009.192-2003《動(dòng)物性食品中克倫特羅殘留量的測(cè)定》第三法——GC/MS法。,基本原理：微孔板包被有針對(duì)克倫特羅IgG的抗抗體；加入克倫特羅抗體，經(jīng)

27、過(guò)溫育和洗滌后；加入酶標(biāo)記物、標(biāo)準(zhǔn)或樣品溶液，克倫特羅與酶標(biāo)記物競(jìng)爭(zhēng)與抗體結(jié)合；沒(méi)有連接的克倫特羅酶標(biāo)記物在被洗滌除去；加入酶底物和發(fā)色劑并且溫育，結(jié)合的酶標(biāo)記物將無(wú)色的發(fā)色劑為藍(lán)色的產(chǎn)物，加入反應(yīng)終止液使顏色有藍(lán)轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色。在450nm處比色測(cè)定。,酶聯(lián)免疫法,競(jìng)爭(zhēng)性酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法測(cè)抗原的基本原理示意圖,酶聯(lián)免疫法,氯霉素檢測(cè)試劑盒,組成：微量測(cè)試孔；氯霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液；10倍濃縮萃取稀釋液；10倍濃縮洗滌液；氯霉素酶標(biāo)記物；底物溶液

28、；反應(yīng)終止液。,主要試劑：氯霉素酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒。,酶聯(lián)免疫法,主要儀器：簡(jiǎn)易的萃取設(shè)備、氮吹儀、離心機(jī)、酶標(biāo)分析儀。,酶標(biāo)儀,酶聯(lián)免疫法,酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵操作： 試劑盒的選擇和準(zhǔn)備； 試樣的處理（同GC-MS）；加樣； 洗滌； 比色。,第四節(jié)激素類獸藥殘留的檢驗(yàn),什么是激素：是生物體內(nèi)特殊的腺體或組織產(chǎn)生的，直接分泌到體液中，通過(guò)體液運(yùn)送到特定的部位，從而引起特殊激動(dòng)作用的一群微量的有機(jī)化合物。 獸藥：同化

29、激素和其他生長(zhǎng)促進(jìn)劑的簡(jiǎn)稱。,激素作用,促進(jìn)氨基酸中蛋白質(zhì)生物合成 促進(jìn)肌肉變大變壯 促進(jìn)食欲 促進(jìn)骨骼的生長(zhǎng) 刺激骨髓，促進(jìn)紅細(xì)胞的產(chǎn)生。,分類,按照來(lái)源：動(dòng)物激素和植物激素結(jié)構(gòu)：甾體（雄激素類、雌激素類、孕激素類）和非甾體類同化激素。,激素的危害：擾亂激素平衡，導(dǎo)致內(nèi)分泌相關(guān)腫瘤、生長(zhǎng)缺陷、生育缺陷、性早熟、男性女性化、女性乳腺癌、卵巢癌等。禁止同化類激素在食品動(dòng)物中使用。測(cè)試方法：熒光分光光度計(jì)、GC、HPLC、GC

30、-MS等。,,HPLC法測(cè)定禽肉中己烯雌酚殘留,原理：樣品勻漿，甲醇提取，HPLC紫外檢測(cè)器（230nm）測(cè)定。 樣品提?。喝鈽?甲醇振蕩提取、離心（重復(fù)2次）-合并上層提取液-過(guò)濾、備用 方法說(shuō)明：甲醇可以使蛋白質(zhì)的氫鍵發(fā)生改變，蛋白質(zhì)凝集，從而釋放出藥物。,,,謝 謝！,色譜法分類,氣相色譜（流動(dòng)相為氣體） 液相色譜（流動(dòng)相為液體）

31、 柱色譜 紙色譜 薄層色譜 吸附色譜 分配色譜

32、 離子交換色譜 排阻色譜,,,,流動(dòng)相物態(tài),流動(dòng)相物態(tài),固定相使用形式,分離過(guò)程機(jī)制,色譜法分類（按固定相狀態(tài)的不同）,流動(dòng)相為氣體（稱為載氣） 固定相為固體吸附劑,氣相色譜,氣固色譜,氣液色譜,流動(dòng)相為氣體（稱為載氣） 固定相為液體,流動(dòng)相為液體（淋洗液）固定相為固體吸附劑。,液相色

33、譜,液固色譜,液液色譜,流動(dòng)相為液體（淋洗液）固定相為液體,,按分離柱不同可分為：填充柱色譜和毛細(xì)管柱色譜,,色譜法分類,(1)氣相色譜：流動(dòng)相為氣體（稱為載氣）。 按分離柱不同可分為：填充柱色譜 毛細(xì)管柱色譜； 按固定相的不同又分為：氣固色譜和氣液色譜,(2)液相色譜：流動(dòng)相為液體（也稱為淋洗液）。 按固定相的不同分為：液固色譜和液液色譜。 離子色譜：液相色譜的一種，

34、以特制的離子交換樹脂為固定相，不同pH值的水溶液為流動(dòng)相。,(3)其他色譜方法,薄層色譜和紙色譜： 比較簡(jiǎn)單的色譜方法,凝膠色譜法：測(cè)聚合物分子量分布。超臨界色譜: CO2流動(dòng)相。高效毛細(xì)管電泳: 九十年代快速發(fā)展、特別適合生物試樣分析分離的高效分析儀器。,色譜法的特點(diǎn),（1）分離效率高 復(fù)雜混合物，有機(jī)同系物、異構(gòu)體、手性異構(gòu)體。（2） 靈敏度高 可以檢測(cè)出μg.g-1(10-6)級(jí)甚至ng.g-1

35、(10-9)級(jí)的物質(zhì)量。（3） 分析速度快 一般在幾分鐘或幾十分鐘內(nèi)可以完成一個(gè)試樣的分析。（4） 應(yīng)用范圍廣 氣相色譜：沸點(diǎn)低于400℃的各種有機(jī)或無(wú)機(jī)試樣的分析。 液相色譜：高沸點(diǎn)、熱不穩(wěn)定、生物試樣的分離分析。 不足之處： 被分離組分的定性較為困難。,,,色譜分析理論基礎(chǔ),色譜分離過(guò)程是在色譜柱內(nèi)完成的。 氣固(液固)色譜的固定相: 多孔性的固體吸附劑顆粒。

36、 固體吸附劑對(duì)試樣中各組分的吸附能力的不同。 氣固色譜的分離機(jī)理: 吸附與脫附的不斷重復(fù)過(guò)程； 氣液(液液)色譜的固定相: 由 擔(dān)體和固定液所組成。 固定液對(duì)試樣中各組分的溶解能力的不同。 氣液色譜的分離機(jī)理：氣液(液液)兩相間的反復(fù)多次分配過(guò)程。,1. 氣相色譜分離過(guò)程,當(dāng)試樣由載氣攜帶進(jìn)入色譜柱與固定相接觸時(shí)，被固定相溶解或吸附;

37、 隨著載氣的不斷通入，被溶解或吸附的組分又從固定相中揮發(fā)或脫附; 揮發(fā)或脫附下的組分隨著載氣向前移動(dòng)時(shí)又再次被固定相溶解或吸附; 隨著載氣的流動(dòng)，溶解、揮發(fā)，或吸附、脫附的過(guò)程反復(fù)地進(jìn)行。,2. 分配系數(shù)（ partion factor） K,組分在固定相和流動(dòng)相間發(fā)生的吸附、脫附，或溶解、揮發(fā)的過(guò)程叫做分配過(guò)程。 在一定溫度下，組分在兩相間分配達(dá)到平衡時(shí)的濃度（單位：g / mL）比，稱為分配系數(shù)，用K 表示

38、，即：,分配系數(shù)是色譜分離的依據(jù)。,分配系數(shù) K 的討論,一定溫度下，組分的分配系數(shù)K越大，出峰越慢；試樣一定時(shí)，K主要取決于固定相性質(zhì)；每個(gè)組份在各種固定相上的分配系數(shù)K不同；選擇適宜的固定相可改善分離效果；試樣中的各組分具有不同的K值是分離的基礎(chǔ)；某組分的K = 0時(shí)，即不被固定相保留，最先流出。,3.分配比 （partion ratio）k,在實(shí)際工作中，也常用分配比來(lái)表征色譜分配平衡過(guò)程。分配比是指在一定溫度和壓力下

39、，組分在兩相間分配達(dá)到平衡時(shí)的質(zhì)量比：,分配比可以由實(shí)驗(yàn)測(cè)得。,分配比也稱： 容量因子(capacity factor)；容量比(capacity ratio)；,結(jié)論,,1. 分配系數(shù)與分配比都是與組分及固定相的熱力學(xué)性質(zhì)有關(guān)的常數(shù)，隨分離柱溫度、柱壓的改變而變化。 2.分配系數(shù)只決定于組分和兩相性質(zhì)，與兩相體積無(wú)關(guān)，分配比不僅決定于組分和兩相性質(zhì)，且與兩相體積有關(guān)，也既分配比隨固定相的量而改變。